| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-23页 |
| 1 PCR 技术在对虾病毒检测中的应用 | 第13-20页 |
| ·常规 PCR | 第13-14页 |
| ·套式 PCR | 第14-15页 |
| ·多重 PCR | 第15-16页 |
| ·PCR 法制备探针 | 第16页 |
| ·实时定量 PCR | 第16-19页 |
| ·TaqMan 实时荧光定量 PCR | 第17-18页 |
| ·荧光染料实时定量 PCR | 第18-19页 |
| ·PCR-ELISA | 第19-20页 |
| 2 对虾传染性肌肉坏死病毒的研究进展 | 第20-23页 |
| ·病原 | 第20页 |
| ·流行地区 | 第20页 |
| ·外观症状和病理变化 | 第20-21页 |
| ·检测方法 | 第21-23页 |
| 第二章 IMNV RT-PCR 检测方法的建立与优化 | 第23-43页 |
| 1 材料与方法 | 第23-34页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·实验仪器 | 第24页 |
| ·IMNV 阳性组织 RNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·IMNV 阳性组织的套式 PCR 法确认检测 | 第25-26页 |
| ·外引物扩增 | 第25-26页 |
| ·内引物扩增 | 第26页 |
| ·传染性肌肉坏死病毒 RT-PCR 检测引物的筛选 | 第26-28页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26-27页 |
| ·四对引物对 IMNV 的 RT-PCR 扩增 | 第27-28页 |
| ·传染性肌肉坏死病毒阳性克隆的制备 | 第28-32页 |
| ·总 RNA 的 RT-PCR 反应及 RT-PCR 产物纯化 | 第28-29页 |
| ·LB 培养基的配置 | 第29页 |
| ·活化菌种 | 第29页 |
| ·CaCl_2法制备感受态细胞 | 第29-30页 |
| ·连接反应及转化 | 第30页 |
| ·蓝白斑筛选及白斑的扩大培养 | 第30页 |
| ·转化子的 PCR 鉴定 | 第30-31页 |
| ·阳性重组质粒测序 | 第31页 |
| ·阳性重组质粒的纯化及拷贝数的测定 | 第31-32页 |
| ·一步 RT-PCR 检测方法灵敏度的优化 | 第32-34页 |
| ·一步 RT-PCR 检测方法退火温度优化 | 第32-33页 |
| ·一步 RT-PCR 检测方法灵敏度的确定 | 第33-34页 |
| 2 结果 | 第34-41页 |
| ·提取的 RNA 的质量检测结果 | 第34页 |
| ·IMNV 阳性组织的套式 PCR 检测结果 | 第34-35页 |
| ·外引物扩增结果 | 第34-35页 |
| ·内引物再次扩增结果 | 第35页 |
| ·传染性肌肉坏死病毒 RT-PCR 检测引物的筛选结果 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆的制备 | 第36-40页 |
| ·RT-PCR 产物纯化结果 | 第36-37页 |
| ·蓝白斑筛选结果 | 第37页 |
| ·转化子的 PCR 扩增电泳鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·阳性重组质粒测序结果 | 第38-39页 |
| ·克隆拷贝数的测定结果 | 第39-40页 |
| ·一步 RT-PCR 反应灵敏度的优化 | 第40-41页 |
| ·一步 RT-PCR 检测方法退火温度优化 | 第40页 |
| ·优化温度下一步 RT-PCR 检测方法灵敏度的确定 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 检测方法的建立 | 第43-54页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43-44页 |
| ·TaqMan 探针及引物的设计 | 第44页 |
| ·含有目的基因的质粒的制备 | 第44页 |
| ·IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 引物及探针的筛选 | 第44页 |
| ·IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 退火温度的优化 | 第44-45页 |
| ·IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 检测方法特异性 | 第45-46页 |
| ·IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 检测方法可重复性及灵敏度 | 第46页 |
| ·IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 检测方法的应用 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-52页 |
| ·筛选出的引物、探针及克隆 | 第46-48页 |
| ·IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 质粒的扩增结果 | 第46-47页 |
| ·IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 质粒的测序结果 | 第47-48页 |
| ·IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 退火温度的优化 | 第48-49页 |
| ·IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 检测方法特异性 | 第49-50页 |
| ·IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 检测方法可重复性和灵敏度 | 第50-51页 |
| ·IMNV TaqMan 实时荧光定量 PCR 检测方法的应用 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 凡纳滨对虾样品检测 | 第54-59页 |
| 1 材料与方法 | 第54-55页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第54-55页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第55页 |
| 2 结果 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 硕士期间取得的成果 | 第73页 |
| 已整理待投的文章 | 第73页 |
