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四种病原菌的xMAP液态芯片多重快速检测技术的研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-12页
第一章 食源性致病菌的研究进展第12-20页
   ·病原的基本特征第12-15页
     ·产气荚膜梭菌第12-13页
     ·鼠疫耶尔森菌第13-14页
     ·小肠结肠炎耶尔森菌第14-15页
     ·单增李斯特菌第15页
   ·流行的历史和危害第15-20页
     ·产气荚膜梭菌第15-16页
     ·鼠疫耶尔森氏菌第16页
     ·小肠结肠炎耶尔森菌第16-18页
     ·单增李斯特菌第18-20页
第二章 病原微生物检测方法的研究进展第20-34页
   ·常规生物学试验第20-21页
     ·传统分离培养法第20-21页
     ·平板计数法和最大可能数法第21页
   ·血清学检测技术第21-22页
     ·补体结合试验第21页
     ·酶联免疫吸附试验第21-22页
     ·间接血凝试验第22页
     ·中和试验第22页
   ·分子生物学检测方法第22-27页
     ·聚合酶链式反应第22-23页
     ·多重PCR第23-24页
     ·实时荧光定量PCR第24-25页
     ·巢式PCR第25页
     ·其它PCR 衍生技术第25页
     ·核酸探针检测技术第25页
     ·核苷酸序列分析第25-26页
     ·指纹图谱分析技术第26页
     ·生物芯片技术第26-27页
   ·XMAP 液态芯片技术第27-32页
     ·xMAP 液态芯片基本原理第28-29页
     ·xMAP 液态芯片的技术优势第29页
     ·液态芯片技术的应用第29-31页
     ·xMAP 液态芯片技术存在的问题第31-32页
     ·前景和展望第32页
   ·本研究的主要内容及目的意义第32-34页
第三章 4 种病原菌特异性基因质粒DNA 的构建第34-54页
   ·材料第34-36页
     ·菌种和载体第34页
     ·主要试剂和耗材第34页
     ·主要仪器与设备第34-35页
     ·主要试剂及培养基的配制第35-36页
   ·方法第36-48页
     ·引物的设计与合成第36-38页
     ·重叠PCR 扩增第38-42页
     ·PCR 扩增产物的鉴定第42页
     ·重叠 PCR 产物的纯化回收第42-43页
     ·目的片段与载体的连接第43-45页
     ·感受态细胞的制备第45页
     ·连接产物的转化第45-46页
     ·菌落PCR 鉴定第46页
     ·阳性克隆的菌种保存第46页
     ·碱裂解法小量提取质粒第46-47页
     ·重组质粒的PCR 鉴定第47-48页
     ·重组质粒的酶切鉴定第48页
     ·重组质粒的序列测定第48页
   ·结果第48-52页
     ·重叠PCR 扩增结果第48-49页
     ·菌落PCR 鉴定结果第49-51页
     ·重组质粒的PCR 鉴定结果第51页
     ·重组质粒的酶切鉴定结果第51-52页
     ·重组质粒的序列分析第52页
   ·讨论第52-53页
   ·小结第53-54页
第四章 4 种病原菌特异性基因质粒DNA 及基因组DNA 的XMAP 液态芯片检测第54-72页
   ·材料第54-58页
     ·菌株第54页
     ·主要仪器设备第54-55页
     ·主要耗材第55页
     ·工具酶及主要试剂第55页
     ·主要溶液和培养基的配制第55-58页
   ·方法第58-63页
     ·引物的设计与合成第58-59页
     ·DNA 模板的制备第59页
     ·单重PCR 扩增第59-60页
     ·多重PCR 扩增第60页
     ·探针与微球的耦联第60-61页
     ·探针交联效率的验证第61页
     ·杂交并检测第61-62页
     ·特异性试验第62页
     ·敏感性试验第62-63页
   ·结果第63-70页
     ·对质粒DNA 的单重和多重PCR 扩增第63-64页
     ·对4 种病原菌基因组DNA 的单重和多重PCR 扩增第64-65页
     ·xMAP 液态芯片对重组质粒DNA 的单重和多重检测结果第65-66页
     ·xMAP 液态芯片对4 种病原菌基因组DNA 的单重和多重检测结果第66-67页
     ·特异性试验第67-69页
     ·敏感性试验第69-70页
   ·讨论第70-71页
   ·小结第71-72页
结论第72-73页
参考文献第73-79页
缩略词表第79-80页
致谢第80-82页
作者简介第82页

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