| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-30页 |
| 1.1 冠菌素的结构、类似物及其生理功能 | 第14-18页 |
| 1.1.1 冠菌素的结构及其类似物 | 第14-15页 |
| 1.1.2 冠菌素的生理功能 | 第15-18页 |
| 1.2 冠菌素的合成 | 第18-23页 |
| 1.2.1 冠菌素的化学合成 | 第18-20页 |
| 1.2.2 冠菌素的生物合成 | 第20-23页 |
| 1.3 冠菌素发酵研究进展 | 第23-26页 |
| 1.3.1 新菌种的发掘 | 第23-24页 |
| 1.3.2 菌种改造 | 第24-25页 |
| 1.3.3 发酵条件的优化 | 第25-26页 |
| 1.4 异源表达的研究进展 | 第26-28页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第28页 |
| 1.6 研究内容及技术路线 | 第28-30页 |
| 第二章 冠菌素产生菌的分离与鉴定 | 第30-42页 |
| 2.1 材料和方法 | 第30-34页 |
| 2.1.1 材料来源 | 第30页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第31页 |
| 2.1.4 培养基 | 第31-32页 |
| 2.1.5 野生病原菌的分离 | 第32页 |
| 2.1.6 基因组DNA的提取 | 第32页 |
| 2.1.7 冠菌素功能基因PCR | 第32-33页 |
| 2.1.8 发酵培养 | 第33页 |
| 2.1.9 冠菌素样品的提取与测定 | 第33页 |
| 2.1.10 菌种鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2 结果和分析 | 第34-40页 |
| 2.2.1 野生菌的分离纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.2 功能基因PCR方法的建立 | 第35页 |
| 2.2.3 PCR方法特异性验证 | 第35-37页 |
| 2.2.4 分离菌株PCR筛选 | 第37-38页 |
| 2.2.5 分离菌株产物鉴定 | 第38-40页 |
| 2.2.6 分离菌株16S rRNA分类鉴定 | 第40页 |
| 2.3 小结和讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 冠菌素产生菌转座诱变及其调控基因初探 | 第42-75页 |
| 3.1 材料和方法 | 第42-50页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第42-43页 |
| 3.1.2 培养基 | 第43-44页 |
| 3.1.3 几种抗生素对受体菌的抗性筛选 | 第44页 |
| 3.1.4 三亲结合 | 第44页 |
| 3.1.5 突变体初筛 | 第44页 |
| 3.1.6 突变体复筛 | 第44-45页 |
| 3.1.7 突变菌株基因组DNA的提取 | 第45页 |
| 3.1.8 随机PCR | 第45-46页 |
| 3.1.9 琼脂糖凝胶电泳和产物回收 | 第46页 |
| 3.1.10 连接和转化 | 第46页 |
| 3.1.11 转化子PCR验证 | 第46-47页 |
| 3.1.12 随机PCR产物测序及结果验证 | 第47-48页 |
| 3.1.13 突变体基因组重测序及验证 | 第48-50页 |
| 3.2 结果和分析 | 第50-73页 |
| 3.2.1 几种抗生素对受体菌抗性的筛选 | 第50页 |
| 3.2.2 Tn5转座系统的筛选 | 第50页 |
| 3.2.3 Tn5转座及突变体的初筛 | 第50-51页 |
| 3.2.4 突变体复筛 | 第51-53页 |
| 3.2.5 随机PCR检测Tn5插入位点 | 第53-54页 |
| 3.2.6 突变株C1、C12插入位点验证 | 第54-56页 |
| 3.2.7 细菌基因组重测序结果及验证 | 第56-65页 |
| 3.2.8 调控基因的初步探究 | 第65-73页 |
| 3.3 小结和讨论 | 第73-75页 |
| 第四章 冠烷酸的异源表达 | 第75-101页 |
| 4.1 材料和方法 | 第76-86页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第76页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第76-77页 |
| 4.1.3 培养基和缓冲液 | 第77-78页 |
| 4.1.4 DNA操作 | 第78-79页 |
| 4.1.5 转化酵母 | 第79页 |
| 4.1.6 CMA生物合成基因的克隆 | 第79-81页 |
| 4.1.7 单基因表达载体的构建 | 第81页 |
| 4.1.8 双基因表达载体的构建 | 第81-85页 |
| 4.1.9 诱导表达 | 第85页 |
| 4.1.10 L-异亮氨酸和L-别异亮氨酸提取方法 | 第85页 |
| 4.1.11 L-异亮氨酸和L-别异亮氨酸检测方法 | 第85页 |
| 4.1.12 冠烷酸(CMA)提取方法 | 第85-86页 |
| 4.1.13 冠烷酸(CMA)毛细管电泳检测方法 | 第86页 |
| 4.1.14 冠烷酸(CMA)标准曲线的建立 | 第86页 |
| 4.2 结果和分析 | 第86-99页 |
| 4.2.1 冠烷酸(CMA)合成基因的克隆 | 第86-87页 |
| 4.2.2 冠烷酸异源表达单基因表达载体的构建 | 第87-91页 |
| 4.2.3 冠烷酸异源表达双基因表达载体的构建 | 第91-93页 |
| 4.2.4 cmaL基因诱导表达和产物检测 | 第93-95页 |
| 4.2.5 CMA合成基因簇诱导表达及终产物检测 | 第95-99页 |
| 4.3 小结和讨论 | 第99-101页 |
| 第五章 冠菌素的稳定性研究 | 第101-109页 |
| 5.1 材料和方法 | 第102-103页 |
| 5.1.1 主要仪器与试剂 | 第102页 |
| 5.1.2 HPLC检测条件 | 第102页 |
| 5.1.3 标准溶液的配置及标准曲线的绘制 | 第102页 |
| 5.1.4 温度和pH对COR稳定性的影响 | 第102-103页 |
| 5.1.5 光源对COR稳定性的影响 | 第103页 |
| 5.1.6 氧化剂对COR稳定性的影响 | 第103页 |
| 5.1.7 数据处理 | 第103页 |
| 5.2 结果和分析 | 第103-107页 |
| 5.2.1 COR标准曲线 | 第103页 |
| 5.2.2 温度和pH对COR稳定性的影响 | 第103-105页 |
| 5.2.3 光照对COR稳定性的影响 | 第105-106页 |
| 5.2.4 氧化剂对COR稳定性的影响 | 第106-107页 |
| 5.3 小结和讨论 | 第107-109页 |
| 第六章 结论 | 第109-112页 |
| 6.1 结论 | 第109-110页 |
| 6.1.1 冠菌素产生菌的分离与鉴定 | 第109页 |
| 6.1.2 冠菌素产生菌转座诱变及其调控基因初探 | 第109-110页 |
| 6.1.3 冠烷酸的异源表达 | 第110页 |
| 6.1.4 冠菌素的稳定性研究 | 第110页 |
| 6.2 创新 | 第110-111页 |
| 6.3 不足与展望 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 附录 | 第127-136页 |
| 个人简历 | 第136页 |