| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-42页 |
| 1 中华绒螯蟹的科研和经济价值 | 第13-15页 |
| 2 无脊椎动物固有免疫系统 | 第15-25页 |
| ·非己的识别 | 第16-17页 |
| ·病原相关分子模式 | 第16页 |
| ·模式识别受体 | 第16-17页 |
| ·免疫信号的调整放大和信号传导 | 第17-18页 |
| ·Toll 信号通路 | 第17-18页 |
| ·Imd 信号通路 | 第18页 |
| ·免疫效应 | 第18-25页 |
| ·细胞免疫效应 | 第19-20页 |
| ·体液免疫效应 | 第20-25页 |
| 3 重要的固有免疫机制——酚氧化酶免疫系统 | 第25-40页 |
| ·酚氧化酶系统简介 | 第25-27页 |
| ·酚氧化酶系统的发现 | 第25-26页 |
| ·酚氧化酶系统的进化 | 第26-27页 |
| ·酚氧化酶系统参与的生物学过程 | 第27页 |
| ·酚氧化酶系统的组成及其分子功能 | 第27-35页 |
| ·识别相关因子 | 第28-29页 |
| ·丝氨酸蛋白酶 | 第29-30页 |
| ·丝氨酸蛋白酶同源物 | 第30页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第30-32页 |
| ·酚氧化酶 | 第32-34页 |
| ·其它因子 | 第34-35页 |
| ·酚氧化酶系统的调控 | 第35-40页 |
| ·基因水平的调控 | 第35-36页 |
| ·转录水平的调控 | 第36页 |
| ·翻译水平的调控 | 第36页 |
| ·翻译后的调控 | 第36页 |
| ·酚氧化酶酶原的激活 | 第36-39页 |
| ·酚氧化酶活性的抑制 | 第39页 |
| ·对调控因子的调控 | 第39页 |
| ·其它层次的调控 | 第39-40页 |
| ·酚氧化酶系统研究展望 | 第40页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第40-42页 |
| 第二章 材料与方法 | 第42-63页 |
| 1 实验材料 | 第42-45页 |
| ·构建cDNA 文库的螃蟹样品及其处理 | 第42页 |
| ·菌刺激和损伤刺激用样品及其处理 | 第42页 |
| ·主要化学试剂及仪器设备 | 第42-45页 |
| ·主要化学试剂 | 第42-43页 |
| ·培养基和试剂的配置 | 第43-44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-63页 |
| ·中华绒螯蟹总RNA 的提取及cDNA 模版的制备 | 第45-47页 |
| ·实验用品的预处理 | 第45页 |
| ·RNA 提取过程 | 第45-46页 |
| ·cDNA 模板的反转录 | 第46-47页 |
| ·cDNA 文库的构建与质量评估 | 第47页 |
| ·cDNA 文库构建 | 第47页 |
| ·质量指标 | 第47页 |
| ·EST 分析 | 第47页 |
| ·全长基因的克隆 | 第47-52页 |
| ·cDNA 文库克隆的保存和测序 | 第47-48页 |
| ·RACE 扩增 | 第48-49页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳回收PCR 产物 | 第49-50页 |
| ·感受态细胞的制备、连接和转化 | 第50-52页 |
| ·基因组织分布情况和时序表达的定量检测 | 第52-54页 |
| ·荧光实时定量PCR 的原理 | 第52-53页 |
| ·引物设计和扩增条件的确立 | 第53页 |
| ·目的基因表达量的检测 | 第53-54页 |
| ·中华绒螯蟹各组织酚氧化酶活力的测定 | 第54-56页 |
| ·中华绒螯蟹各组织粗酶液的制备 | 第54页 |
| ·总蛋白浓度的测定（考马斯亮蓝法） | 第54-56页 |
| ·酚氧化酶比活力的测定 | 第56页 |
| ·蛋白的原核重组表达 | 第56-59页 |
| ·重组质粒构建 | 第56-57页 |
| ·重组蛋白的表达与检测 | 第57页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第57-58页 |
| ·重组蛋白的复性 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白的浓度测定 | 第59页 |
| ·RNAi | 第59-63页 |
| ·引物设计 | 第59-60页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第60-62页 |
| ·干扰实验及其效果检验 | 第62-63页 |
| 第三章 实验结果 | 第63-151页 |
| 1 中华绒螯蟹 cDNA 文库 | 第63页 |
| 2 EST（表达序列标签）分析 | 第63-68页 |
| ·EST 信息 | 第63-65页 |
| ·Blast 比对分析 | 第65-66页 |
| ·EST 的分类和功能注释 | 第66-68页 |
| 3 免疫相关基因的鉴定 | 第68页 |
| 4 中华绒螯蟹酚氧化酶系统基因的研究 | 第68-147页 |
| ·中华绒螯蟹模式识别丝氨酸蛋白酶（EsPRSP）的cDNA 特征及mRNA 表达 | 第75-82页 |
| ·EsPRSP 全长cDNA 的获得 | 第75-76页 |
| ·EsPRSP 一级结构、同源性分析和空间结构预测 | 第76-82页 |
| ·中华绒螯蟹前酚氧化酶激活酶1（EsPAP1）的克隆、表达及RNAi 效应 | 第82-92页 |
| ·EsPAP1 全长cDNA 的获得 | 第82页 |
| ·EsPAP1 结构、同源性和进化分析 | 第82-88页 |
| ·EsPAP1 的组织分布 | 第88页 |
| ·EsPAP1 基因的时序表达 | 第88-90页 |
| ·注射EsPAP1 dsRNA 后中华绒螯蟹体色和酶活力的变化 | 第90-92页 |
| ·中华绒螯蟹前酚氧化酶激活酶2（EsPAP2）的克隆、表达 | 第92-100页 |
| ·EsPAP2 全长cDNA 的获得 | 第92页 |
| ·EsPAP2 结构、同源性和进化分析 | 第92-99页 |
| ·EsPAP2 的组织分布 | 第99页 |
| ·EsPAP2 基因的时序表达 | 第99-100页 |
| ·中华绒螯蟹前酚氧化酶激活酶3（EsPAP3）的克隆、表达及RNAi 效应 | 第100-108页 |
| ·EsPAP3 全长cDNA 的获得 | 第100-104页 |
| ·EsPAP3 的组织分布 | 第104-105页 |
| ·EsPAP3 的时序表达 | 第105-106页 |
| ·注射EsPAP3 dsRNA 后酚氧化酶活性的变化 | 第106-107页 |
| ·EsPAP3 成熟肽的原核重组表达 | 第107-108页 |
| ·中华绒螯蟹丝氨酸蛋白酶同源物（EsSPH）的克隆、表达 | 第108-113页 |
| ·EsSPH 全长cDNA 的获得 | 第108-109页 |
| ·EsSPH 结构、同源性和进化分析 | 第109-113页 |
| ·中华绒螯蟹丝氨酸蛋白酶及其同源物的比较分析 | 第113-122页 |
| ·EsPRSP, EsPAPs, EsSPH 之间的相似性比较 | 第113-115页 |
| ·EsPAPs 和EsSPH 与其它物种同源序列的多序列比对和进化分析 | 第115-122页 |
| ·中华绒螯蟹丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin（Esserpin）的克隆与表达 | 第122-125页 |
| ·Esserpin 全长cDNA 的获得 | 第122页 |
| ·Esserpin 的结构特征和同源性分析 | 第122-125页 |
| ·中华绒螯蟹丝氨酸蛋白酶抑制剂PAP II（EsPAP II）的克隆与表达 | 第125-129页 |
| ·EsPAP II cDNA 全长序列的获得 | 第125页 |
| ·EsPAP II 的结构、同源性和进化分析 | 第125-128页 |
| ·EsPAP II 的组织分布 | 第128-129页 |
| ·EsPAP II 基因的时序表达 | 第129页 |
| ·中华绒螯蟹丝氨酸蛋白酶抑制剂pacifastin（EsPLC）的克隆与表达 | 第129-134页 |
| ·EsPLC 的结构、同源性和进化分析 | 第129-132页 |
| ·EsPLC 的组织分布 | 第132-133页 |
| ·EsPLC 基因的时序表达 | 第133-134页 |
| ·中华绒螯蟹前酚氧化酶基因（EsproPO）的克隆、表达和酶活力 | 第134-142页 |
| ·中华绒螯蟹前酚氧化酶基因（EsproPO）cDNA 全长序列的获得 | 第134页 |
| ·EsproPO 结构、同源性和进化分析 | 第134-140页 |
| ·EsproPO mRNA 和酶活力的组织分布 | 第140页 |
| ·EsproPO mRNA 和酶活力的时序变化 | 第140-142页 |
| ·中华绒螯蟹酚氧化酶调控因子Peroxinetin（Esperoxinectin）的克隆与表达. | 第142-147页 |
| ·EsPeroxinetin cDNA 全长序列的获得 | 第142页 |
| ·Esperoxinectin 结构、同源性和进化分析 | 第142-147页 |
| 5 中华绒螯蟹酚氧化酶系统各因子的进化分析 | 第147-151页 |
| 第四章 讨论 | 第151-171页 |
| 1 中华绒螯蟹表达序列和免疫基因的富集 | 第151-153页 |
| 2 中华绒螯免疫相关基因的鉴定 | 第153-156页 |
| ·凝血与黑化相关因子 | 第153-154页 |
| ·Toll 信号通路相关因子 | 第154-155页 |
| ·补体系统 | 第155页 |
| ·压力相关免疫因子 | 第155-156页 |
| ·凋亡相关和其它免疫因子 | 第156页 |
| 3. 中华绒螯蟹酚氧化酶系统相关分子 | 第156-168页 |
| ·中华绒螯蟹模式识别丝氨酸蛋白酶（EsPRSP） | 第156-158页 |
| ·中华绒螯蟹前酚氧化酶激活酶1（EsPAP1） | 第158-160页 |
| ·中华绒螯蟹酚氧化酶激活酶2（EsPAP2） | 第160-161页 |
| ·中华绒螯蟹酚氧化酶激活酶3（EsPAP3） | 第161-162页 |
| ·中华绒螯蟹Pacifastin 抑制剂(EsPLC) | 第162-164页 |
| ·中华绒螯蟹KAZAL 型丝氨酸蛋白酶抑制剂PAPII | 第164-165页 |
| ·中华绒螯蟹酚氧化酶（EsproPO） | 第165-167页 |
| ·中华绒螯蟹EsSPH，Esserpin，Esperoxinectin 基因 | 第167-168页 |
| 4. 中华绒螯蟹酚氧化酶系统的调控 | 第168-169页 |
| 5. 中华绒螯蟹酚氧化酶系统的进化 | 第169-171页 |
| 结论 | 第171-173页 |
| 参考文献 | 第173-195页 |
| 撰写和发表论文情况 | 第195-196页 |
| 致谢 | 第196页 |
