| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 0 前言 | 第14-34页 |
| ·O-GlcNAc 的生物合成 | 第15-21页 |
| ·己糖生物合成途径（HBP） | 第15-17页 |
| ·O-GlcNAc 糖基转移酶（OGT） | 第17-20页 |
| ·O-GlcNAc 糖苷酶（OGA） | 第20-21页 |
| ·O-GlcNAc 与磷酸化的关系 | 第21-23页 |
| ·O-GlcNAc在信号转导中的作用 | 第23-25页 |
| ·O-GlcNAc与疾病 | 第25-26页 |
| ·O-GlcNAc 与糖尿病 | 第25-26页 |
| ·O-GlcNAc 与神经退行性疾病 | 第26页 |
| ·O-GlcNAc 与肿瘤 | 第26页 |
| ·P13K/Akt 信号转导通路 | 第26-34页 |
| ·P13K/Akt 的结构特点 | 第27页 |
| ·P13K/Akt 信号转导通路 | 第27-28页 |
| ·P13K 的异常与细胞转化 | 第28-29页 |
| ·Akt 对肿瘤细胞存活和增殖的影响 | 第29-30页 |
| ·P13K/Akt 信号通路与肿瘤的侵袭和转移 | 第30-31页 |
| ·P13K/Akt 信号通路肿瘤治疗的靶点 | 第31-34页 |
| ·发展和应用小分子抑制剂 | 第31-32页 |
| ·反义策略 | 第32页 |
| ·显性负效应蛋白的表达 | 第32-34页 |
| 1 P13K/Akt 信号在 O-GlcNAc 介导的小鼠乳腺癌转移过程中的作用 | 第34-54页 |
| ·O-GlcNAc 对小鼠乳腺癌4T1 细胞生物学特性的影响 | 第35-45页 |
| ·实验材料 | 第35-38页 |
| ·细胞株 | 第35页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·主要试剂的配制 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·细胞复苏 | 第38页 |
| ·细胞培养与传代 | 第38页 |
| ·免疫印迹 | 第38-39页 |
| ·PUGNAc 处理增加O-GlcNAc 水平 | 第39页 |
| ·细胞迁移实验 | 第39页 |
| ·肿瘤形成和转移实验 | 第39-40页 |
| ·数据分析 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-43页 |
| ·4T1细胞中OGT沉默对O-GlcNAc表达的影响 | 第40页 |
| ·PUGNAc 处理增加4T1 细胞中O-GlcNAc 的表达 | 第40-41页 |
| ·O-GlcNAc 对乳腺癌细胞迁移能力的影响 | 第41-42页 |
| ·O-GlcNAc 对乳腺癌体内转移的影响 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| ·P13K/Akt 信号在O-GlcNAc 介导的乳腺癌转移过程中的作用 | 第45-54页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·细胞株 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| ·免疫印记分析 | 第46页 |
| ·免疫沉淀 | 第46页 |
| ·O-GlcNAc 对P13K/Akt 信号的影响 | 第46页 |
| ·LY294002 对Akt 活性抑制实验 | 第46-47页 |
| ·LY294002对细胞迁移的影响 | 第47页 |
| ·实验结果 | 第47-51页 |
| ·O-GlcNAc 对Akt 活性的影响 | 第47-48页 |
| ·O-GlcNAc对Akt亚型活性的影响 | 第48-49页 |
| ·O-GlcNAc 对Akt 的修饰作用 | 第49-50页 |
| ·LY294002对O-GlcNAc介导的乳腺癌细胞迁移的影响 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 2 Akt1 在乳腺癌发生发展过程中的作用 | 第54-74页 |
| ·Akt1 沉默细胞株的构建 | 第55-68页 |
| ·实验材料 | 第55-56页 |
| ·细胞株 | 第55页 |
| ·菌种和载体 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要试剂的配制 | 第55-56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-63页 |
| ·Akt1干扰载体的构建 | 第56-61页 |
| ·小鼠Akt1 shRNA 片段的设计 | 第57-59页 |
| ·DNA 寡核苷酸片段的退火 | 第59页 |
| ·采用碱裂解法提取pLKO.1-puro质粒 | 第59页 |
| ·pLKO.1-puro质粒的双酶切 | 第59页 |
| ·目的DNA 片段的回收 | 第59-60页 |
| ·连接 | 第60页 |
| ·转化 | 第60页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第60-61页 |
| ·Akt1 基因沉默乳腺癌细胞株的构建 | 第61-63页 |
| ·细胞培养 | 第61页 |
| ·慢病毒的制备 | 第61页 |
| ·慢病毒感染和细胞筛选实验 | 第61-62页 |
| ·总RNA的制备（Trizol法） | 第62页 |
| ·反转录PCR（RT-PCR）制备cDNA | 第62页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第62-63页 |
| ·Western Blotting | 第63页 |
| ·实验结果 | 第63-67页 |
| ·Akt1干扰载体的构建 | 第63-64页 |
| ·Akt1 基因沉默细胞株的构建 | 第64页 |
| ·实时荧光定量PCR 检测Akt1 的表达 | 第64-66页 |
| ·WB 检测Akt1 的表达 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| ·Akt1基因沉默对小鼠乳腺癌细胞4T1生物学特性的影响 | 第68-74页 |
| ·实验材料 | 第68-69页 |
| ·细胞株 | 第68-69页 |
| ·实验动物 | 第69页 |
| ·主要试剂 | 第69页 |
| ·主要仪器 | 第69页 |
| ·实验方法 | 第69页 |
| ·实验结果 | 第69-72页 |
| ·Akt1 沉默不影响乳腺癌细胞的体外增殖及原位瘤的生长 | 第69-70页 |
| ·Akt1沉默抑制乳腺癌细胞的迁移能力 | 第70-71页 |
| ·Akt1 沉默抑制乳腺癌细胞的肺转移能力 | 第71-72页 |
| ·小结 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-74页 |
| 总结和展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 个人简历 | 第89-90页 |
| 发表的学术论文 | 第90页 |
