鸡Gal-2成熟肽cDNA片段在毕赤酵母中的分泌表达与抑菌活性研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 文献综述 | 第13-22页 |
| 引言 | 第22-23页 |
| 1 材料与方法 | 第23-38页 |
| ·实验材料 | 第23-29页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·菌株与载体 | 第23页 |
| ·主要工具酶及试剂盒 | 第23页 |
| ·其他相关试剂 | 第23-24页 |
| ·标准参照物 | 第24页 |
| ·缓冲液及培养基的配制 | 第24-27页 |
| ·玻璃器皿的准备 | 第27页 |
| ·塑料耗材的准备 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27-29页 |
| ·实验方法 | 第29-38页 |
| ·提取目的基因 | 第29-30页 |
| ·pMD18-T-Gal-2 质粒的构建 | 第30-32页 |
| ·重组pMD18-T-Gal-2 质粒的鉴定 | 第32页 |
| ·表达载体pPIC9k-Gal-2 的构建 | 第32-34页 |
| ·表达载体pPIC9k-Gal-2 的鉴定 | 第34页 |
| ·电击转化酵母菌GS115 | 第34-35页 |
| ·筛选His~+转化子的遗传霉素抗性 | 第35页 |
| ·验证重组菌的Mut~+和MutS 表型 | 第35页 |
| ·检测基因表达 | 第35-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-46页 |
| ·肺脏组织总RNA 的提取 | 第38页 |
| ·青脚麻鸡Gal-2 基因片段的RT-PCR | 第38-39页 |
| ·克隆载体的鉴定与氨基酸序列的分析 | 第39-40页 |
| ·重组pPIC9k-Gal-2 表达载体的构建 | 第40-42页 |
| ·Gal-2 成熟肽的PCR 扩增 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pPIC9k-Gal-2 的鉴定 | 第41-42页 |
| ·酵母菌的转化 | 第42-44页 |
| ·酵母菌的培养 | 第42页 |
| ·His~+阳性转化子的筛选 | 第42-43页 |
| ·阳性多拷贝子的筛选 | 第43-44页 |
| ·阳性转化子的表型鉴定 | 第44页 |
| ·诱导表达蛋白检测 | 第44-46页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳检测 | 第44-45页 |
| ·抑菌试验结果 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| ·Gal-2 引物与序列分析 | 第46页 |
| ·青脚麻鸡Gal-2 cDNA 的克隆 | 第46-47页 |
| ·表达载体与宿主细胞的选择 | 第47页 |
| ·酵母菌阳性转化子的筛选和表型鉴定 | 第47-48页 |
| ·蛋白表达与活性分析 | 第48-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
