| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-22页 |
| ·几丁质简介 | 第12-13页 |
| ·昆虫蜕皮 | 第13页 |
| ·β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶和蜕皮激素接受子3 | 第13-14页 |
| ·β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶 | 第13-14页 |
| ·蜕皮激素接受子3(HR3) | 第14页 |
| ·应用与前景 | 第14-15页 |
| ·β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶的应用前景 | 第14-15页 |
| ·蜕皮激素接受子3的应用前景 | 第15页 |
| ·国内外研究现状 | 第15-19页 |
| ·昆虫β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶cDNA的克隆 | 第15-16页 |
| ·昆虫蜕皮激素接受子3基因cDNA的克隆 | 第16页 |
| ·昆虫β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因在虫体内的表达 | 第16-17页 |
| ·昆虫蜕皮激素接受子3基因的体内表达 | 第17页 |
| ·昆虫β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶和蜕皮激素接受子3基因的拷贝数研究 | 第17页 |
| ·NAG在临床的应用价值 | 第17-18页 |
| ·NAG在水生动物方面的应用 | 第18页 |
| ·丙酮、巯基乙醇等有机溶剂对黄粉虫NAG酶活力的影响 | 第18-19页 |
| ·昆虫蜕皮在防治害虫领域的展望 | 第19页 |
| ·三种鳞翅目昆虫介绍 | 第19-20页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第20页 |
| ·研究目的 | 第20页 |
| ·研究意义 | 第20页 |
| ·本研究课题的来源及主要研究内容 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·分子生物学用酶及试剂盒和各种试剂 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·仪器设备 | 第22-23页 |
| ·昆虫来源 | 第23页 |
| ·研究方法 | 第23-30页 |
| ·总RNA提取 | 第23-24页 |
| ·利用RT-PCR扩增保守区之间的cDNA序列 | 第24-26页 |
| ·RACE引物设计 | 第26-27页 |
| ·3'-RACE的试验步骤 | 第27页 |
| ·5'-RACE的试验步骤 | 第27-30页 |
| ·全长cDNA的获取及其序列分析 | 第30页 |
| ·cDNA序列分析 | 第30-31页 |
| ·利用Blast软件进行序列相似性检索 | 第30页 |
| ·分子质量、碱基组成、碱基分布 | 第30页 |
| ·全长cDNA可读框架分析 | 第30页 |
| ·对ORF进行限制性酶切分析 | 第30页 |
| ·核酸序列对齐分析的功能预测 | 第30-31页 |
| ·蛋白质基本性质分析 | 第31页 |
| ·信号肽分析 | 第31页 |
| ·蛋白质功能预测 | 第31页 |
| ·蛋白质序列同源性分析及蛋白质功能预测 | 第31页 |
| ·结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测 | 第31页 |
| ·蛋白质结构预测 | 第31-32页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第31-32页 |
| ·蛋白质三级结构预测 | 第32页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达研究 | 第32-36页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因cDNA序列ORF的PCR反应 | 第32页 |
| ·PCR产物酶切反应 | 第32页 |
| ·E.coli质粒DNA提取和酶切 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌表达载体构建 | 第33页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因在大肠杆菌中诱导表达 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第33页 |
| ·三氯乙酸(TCA)沉淀 | 第33-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-60页 |
| ·RNA的提取 | 第36页 |
| ·RNA完整性的检测 | 第36页 |
| ·纯度及产量检测 | 第36页 |
| ·RT-PCR得到的基因特异性片段及序列分析 | 第36-37页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因特异性片段及序列分析 | 第36-37页 |
| ·蜕皮激素接受子3(HR3)基因特异性片段及序列分析 | 第37页 |
| ·cDNA序列的3'-RACE结果 | 第37-38页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因cDNA序列的3’-RACE结果 | 第37页 |
| ·蜕皮激素接受子3基因cDNA序列ORF3'cDNA序列的克隆结果 | 第37-38页 |
| ·cDNA序列的5'-RACE结果 | 第38-41页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因5'-RACE结果 | 第38-39页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因5'-RACE的测序结果 | 第39-41页 |
| ·蜕皮激素接受子3(HR3)5'-RACE结果 | 第41页 |
| ·基因cDNA序列的获得 | 第41-45页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因cDNA序列的获得 | 第42-43页 |
| ·蜕皮激素接受子3基因cDNA序列的获得 | 第43-45页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶和蜕皮激素接受子3基因特征 | 第45-48页 |
| ·碱基序列组成分析 | 第45-46页 |
| ·氨基酸序列组成分析 | 第46-48页 |
| ·信号肽分析 | 第48页 |
| ·氨基酸结构域预测 | 第48-51页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶氨基酸结构域预测 | 第49-50页 |
| ·蜕皮激素接受子3氨基酸结构域预测 | 第50-51页 |
| ·氨基酸的疏水性分析 | 第51-52页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶氨基酸疏水性分析 | 第51-52页 |
| ·蜕皮激素接受子3氨基酸疏水性分析 | 第52页 |
| ·序列同源性比较 | 第52-58页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因与其它昆虫同源性比较 | 第53-54页 |
| ·蜕皮激素接受子3基因与其它昆虫同源性比较 | 第54-56页 |
| ·聚类分析 | 第56-58页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第58-60页 |
| ·大肠杆菌重组表达载体的构建和鉴定 | 第59页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因在大肠杆菌中的融合表达 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| ·关于小地老虎β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶拷贝数的探讨 | 第60页 |
| ·关于八字地老虎和粘虫蜕皮激素接受子3拷贝数的探讨 | 第60页 |
| ·小地老虎β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶表达系统的选择 | 第60-61页 |
| ·感受态细胞的制备和载体构建的探讨 | 第61页 |
| ·三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白的讨论 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第68页 |
