| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文缩写词汇表 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-18页 |
| 1 仔猪断奶腹泻的机理研究进展 | 第12-15页 |
| ·仔猪早期断奶综合征 | 第12-13页 |
| ·早期断奶对仔猪胃、肠道黏膜屏障功能的影响 | 第13-15页 |
| 2 断奶仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的研究现状 | 第15页 |
| 3 肠毒素性大肠杆菌仔猪腹泻的研究进展 | 第15-16页 |
| ·病原 | 第15-16页 |
| ·ETEC肠毒素 | 第16页 |
| 4 Western免疫印迹法的研究进展及应用 | 第16-17页 |
| 5 选题目的及意义 | 第17-18页 |
| 第二部分 试验部分 | 第18-46页 |
| 试验Ⅰ 目的菌株ETEC肠毒素的检测 | 第18-26页 |
| 1 实验试剂及仪器 | 第18页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·实验试剂 | 第18页 |
| ·实验仪器 | 第18页 |
| 2 实验方法 | 第18-23页 |
| ·ETEC纯培养 | 第18-19页 |
| ·ETEC肠毒素的鉴定 | 第19-22页 |
| ·大肠杆菌ETEC的DNA模板制备 | 第19页 |
| ·引物设计合成 | 第19-20页 |
| ·肠毒素LT、ST-Ⅰ、ST-Ⅱ的PCR扩增 | 第20页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第20-21页 |
| ·PCR产物酶切鉴定 | 第21页 |
| ·PCR产物的回收测序 | 第21-22页 |
| ·粪样的检测 | 第22-23页 |
| 3 实验结果 | 第23-25页 |
| ·ETEC纯培养及计数 | 第23-24页 |
| ·ETEC肠毒素的PCR鉴定结果 | 第24页 |
| ·ETEC肠毒素的酶切鉴定结果 | 第24-25页 |
| 4 结果分析与讨论 | 第25-26页 |
| 实验Ⅱ ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响 | 第26-46页 |
| 1 实验材料和方法 | 第26-30页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第26页 |
| ·实验仪器 | 第26页 |
| ·组织中总RNA提取实验试剂的配制及准备 | 第26-27页 |
| ·实验器具与材料的准备 | 第26-27页 |
| ·实验试剂的配制与准备 | 第27页 |
| ·Western免疫印迹实验试剂的配制及准备 | 第27-30页 |
| ·实验试剂的配制 | 第27-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-38页 |
| ·动物分组攻毒 | 第30-31页 |
| ·引物的设计和合成 | 第31-34页 |
| ·组织中总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·组织中总RNA浓度的测定与鉴定 | 第32-33页 |
| ·总RNA的逆转录反应 | 第33页 |
| ·cDNA的PCR扩增反应 | 第33-34页 |
| ·PCR扩增及产物的回收测序 | 第34页 |
| ·Western免疫印迹实验方法及步骤 | 第34-38页 |
| ·胃粘膜、回肠、结肠组织总蛋白的提取 | 第34-35页 |
| ·蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35-36页 |
| ·蛋白的免疫反应 | 第36页 |
| ·化学发光试剂检测 | 第36页 |
| ·显影,定影 | 第36-37页 |
| ·凝胶图象分析 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-44页 |
| ·组织中总RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·紧密连接蛋白ZO-1的PCR扩增结果 | 第39-41页 |
| ·ZO-1在胃黏膜中的PCR扩增结果 | 第39页 |
| ·ZO-1在回肠中的PCR扩增结果 | 第39-40页 |
| ·ZO-1在结肠中的PCR扩增结果 | 第40-41页 |
| ·内参基因GAPDH的PCR扩增结果 | 第41页 |
| ·紧密连接蛋白ZO-1的实时荧光定量PCR检测结果 | 第41-43页 |
| ·ZO-1在胃粘膜中的实时荧光定量PCR检测结果 | 第41-42页 |
| ·ZO-1在回肠中的实时荧光定量PCR检测结果 | 第42-43页 |
| ·ZO-1在结肠中的实时荧光定量PCR检测结果 | 第43页 |
| ·紧密连接蛋白ZO-1的Western Bloting检测结果 | 第43-44页 |
| 4 结果分析与讨论 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
