| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-30页 |
| ·枯草芽孢杆菌 | 第18页 |
| ·木聚糖及其化学结构 | 第18-19页 |
| ·木聚糖酶 | 第19-26页 |
| ·β-1,4-内切木聚糖酶 | 第19-25页 |
| ·木聚糖酶的来源 | 第20-21页 |
| ·木聚糖酶高产菌株的选育 | 第21页 |
| ·木聚糖酶的合成与分离纯化 | 第21-22页 |
| ·木聚糖酶的理化性质 | 第22页 |
| ·木聚糖酶的多样性 | 第22-23页 |
| ·木聚糖酶的分类 | 第23页 |
| ·木聚糖酶的分子结构区域 | 第23页 |
| ·木聚糖酶的分子生物学 | 第23-24页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第24-25页 |
| ·木糖苷酶 | 第25-26页 |
| ·不同酶之间的协同增效作用 | 第26页 |
| ·木聚糖酶基因的分子改造 | 第26-28页 |
| ·本文研究内容、目的和意义 | 第28-30页 |
| ·研究内容 | 第28-29页 |
| ·木聚糖酶高产菌株的筛选及其酶学性质研究 | 第28页 |
| ·木聚糖酶基因xynA的克隆与高效表达体系的构建 | 第28页 |
| ·木聚糖酶基因多样性研究 | 第28页 |
| ·木聚糖酶基因xynA的缺失表达 | 第28-29页 |
| ·研究目的和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 木聚糖酶高产菌株的筛选及其快速纯化技术研究 | 第30-52页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·菌种 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要仪器与设备 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-38页 |
| ·高产菌株筛选 | 第31-33页 |
| ·菌种纯化 | 第31页 |
| ·初筛 | 第31-32页 |
| ·复筛 | 第32页 |
| ·木聚糖酶活力的测定 | 第32-33页 |
| ·Bacillus subtilis BE-91产酶条件的优化 | 第33-34页 |
| ·单因素轮换试验设计 | 第33页 |
| ·均匀试验设计 | 第33-34页 |
| ·菌体生长曲线及产酶曲线 | 第34页 |
| ·优化前后酶活力比较 | 第34页 |
| ·Bacillus subtilis BE-91木聚糖酶xynA的分离纯化 | 第34-37页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第34-35页 |
| ·超滤法 | 第35页 |
| ·Sephadex G-100葡聚糖凝胶层析法 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE法 | 第36-37页 |
| ·Bacillus subtilis BE-91木聚糖酶xynA酶学性质研究 | 第37-38页 |
| ·超声波破碎法分析BE-91菌株胞内木聚糖酶活力 | 第37页 |
| ·蛋白酶抑制剂对酶活力的影响 | 第37页 |
| ·温度稳定性 | 第37-38页 |
| ·pH稳定性 | 第38页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第38页 |
| ·动力学常数 | 第38页 |
| ·等电点 | 第38页 |
| ·分子量 | 第38页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-51页 |
| ·高产菌株筛选 | 第38-40页 |
| ·初筛 | 第38-39页 |
| ·D-木糖标准曲线的制作 | 第39-40页 |
| ·复筛 | 第40页 |
| ·Bacillus subtilis BE-91产酶条件的优化 | 第40-45页 |
| ·单因素试验 | 第40-43页 |
| ·均匀试验设计 | 第43-44页 |
| ·菌体生长曲线及产酶曲线 | 第44页 |
| ·优化前后酶活力比较 | 第44-45页 |
| ·Bacillus subtilis BE-91木聚糖酶xynA的分离纯化 | 第45-48页 |
| ·蛋白标准曲线 | 第45-46页 |
| ·超滤 | 第46页 |
| ·葡聚糖凝胶层析 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第46-47页 |
| ·纯化效率分析 | 第47-48页 |
| ·Bacillus subtilis BE-91木聚糖酶xynA酶学性质研究 | 第48-51页 |
| ·BE-91菌株胞内木聚糖酶活力 | 第48页 |
| ·蛋白酶抑制剂对木聚糖酶稳定性的影响 | 第48-49页 |
| ·温度稳定性 | 第49页 |
| ·pH稳定性 | 第49-50页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第50页 |
| ·动力学常数 | 第50页 |
| ·等电点 | 第50页 |
| ·分子量 | 第50页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第50-51页 |
| ·结论 | 第51-52页 |
| 第三章 BE-91菌株木聚糖酶基因xynA的克隆与高效表达 | 第52-76页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·菌种和载体 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器与设备 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·Bacillus subtilis用培养基 | 第53页 |
| ·E.coli用培养基 | 第53页 |
| ·P.pastoris用培养基 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-63页 |
| ·引物设计 | 第53-54页 |
| ·Bacillus subtilis BE-91木聚糖酶基因xynA的克隆 | 第54-57页 |
| ·BE-91菌株基因组DNA的提取 | 第54页 |
| ·xynA1的PCR扩增、连接转化和序列测定 | 第54-55页 |
| ·xynA2的扩增、连接转化和序列测定 | 第55-56页 |
| ·木聚糖酶基因xynA的扩增、连接转化和序列分析 | 第56-57页 |
| ·Bacillus subtilis BE-91木聚糖酶基因xynA的表达 | 第57-62页 |
| ·木聚糖酶基因xynA在E.coli中的表达 | 第57-59页 |
| ·木聚糖酶基因xynA在P.pastoris中的表达 | 第59-62页 |
| ·pEASY-xynA-BL21诱导条件的优化 | 第62页 |
| ·IPTG浓度对产酶的影响 | 第62页 |
| ·诱导时机对产酶的影响 | 第62页 |
| ·诱导培养时间对产酶的影响 | 第62页 |
| ·诱导培养温度对产酶的影响 | 第62页 |
| ·重组木聚糖酶的纯化及酶学性质研究 | 第62-63页 |
| ·重组木聚糖酶的纯化 | 第62-63页 |
| ·重组木聚糖酶的酶学性质研究 | 第63页 |
| ·重组木聚糖酶酶解产物HPLC分析 | 第63页 |
| ·结果和分析 | 第63-75页 |
| ·Bacillus subtilis BE-91木聚糖酶基因xynA的克隆 | 第63-68页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第63-64页 |
| ·木聚糖酶基因xynA1的克隆与序列测定 | 第64-65页 |
| ·木聚糖酶基因xynA2的克隆与序列分析 | 第65-67页 |
| ·木聚糖酶基因xynA的克隆及序列分析 | 第67-68页 |
| ·木聚糖酶基因xynA的表达 | 第68-71页 |
| ·在E.coli中的表达 | 第68-70页 |
| ·在P.pastoris中的表达 | 第70-71页 |
| ·pEASY-xynA-BL21诱导条件优化 | 第71-73页 |
| ·IPTG浓度对产酶的影响 | 第71-72页 |
| ·诱导时机对产酶的影响 | 第72页 |
| ·诱导培养时间对产酶的影响 | 第72-73页 |
| ·诱导培养温度对产酶的影响 | 第73页 |
| ·pEASY-xynA-BL21重组木聚糖酶的纯化及酶学性质研究 | 第73-75页 |
| ·重组木聚糖酶的纯化 | 第73-74页 |
| ·重组木聚糖酶的酶学性质研究 | 第74页 |
| ·重组木聚糖酶酶解产物HPLC分析 | 第74-75页 |
| ·结论 | 第75-76页 |
| 第四章 BE-91菌株木聚糖酶基因多样性研究 | 第76-92页 |
| ·菌种和载体 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-82页 |
| ·菌种的培养 | 第76-77页 |
| ·Bacillus subtilis BE-91基因组文库的构建 | 第77-79页 |
| ·基因组DNA提取 | 第77页 |
| ·基因组DNA的酶切 | 第77页 |
| ·E.coli质粒的提取 | 第77页 |
| ·基因组DNA的连接转化 | 第77-79页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第79-80页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第79页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第79-80页 |
| ·xynA、xynB、xynC、xynD和xynP序列之间的比对将测定所得序列采 | 第80页 |
| ·木聚糖酶基因的表达 | 第80-82页 |
| ·合成引物 | 第80页 |
| ·PCR扩增 | 第80-81页 |
| ·表达载体的构建 | 第81页 |
| ·表达载体的转化、表达 | 第81-82页 |
| ·结果和分析 | 第82-91页 |
| ·Bacillus subtilis BE-91基因文库的构建 | 第82-83页 |
| ·基因组DNA提取和酶切 | 第82页 |
| ·基因组DNA的连接转化 | 第82-83页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第83-85页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第83页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第83-85页 |
| ·木聚糖酶基因序列分析 | 第85-89页 |
| ·xynA | 第85页 |
| ·xynB | 第85-86页 |
| ·xynC | 第86-87页 |
| ·xynD | 第87-88页 |
| ·xynP | 第88-89页 |
| ·木聚糖酶基因之间的比对 | 第89页 |
| ·xynB、xynC、xynD、xynP的表达 | 第89-91页 |
| ·表达载体的构建 | 第89页 |
| ·表达载体的转化、表达 | 第89-91页 |
| ·结论 | 第91-92页 |
| 第五章 BE-91菌株木聚糖酶基因xynA的缺失表达 | 第92-106页 |
| ·菌种和载体 | 第92页 |
| ·方法 | 第92-98页 |
| ·木聚糖酶基因xynA序列分析 | 第92-93页 |
| ·引物设计 | 第93页 |
| ·木聚糖酶基因xynA UTR的缺失表达 | 第93-95页 |
| ·xynA3、xynA4和xynA5的PCR扩增 | 第93-94页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第94页 |
| ·原核表达载体在E coli中的表达 | 第94-95页 |
| ·阳性重组子的鉴定 | 第95页 |
| ·木聚糖酶基因xynA 5’-翻译区的缺失表达 | 第95-96页 |
| ·xynA6、xynA7和xynA8的PCR扩增 | 第95-96页 |
| ·原核表达载体的构建及表达 | 第96页 |
| ·木聚糖酶基因xynA3’-翻译区的缺失表达 | 第96-97页 |
| ·xynA9、xynA10和xynA11的PCR扩增 | 第96-97页 |
| ·原核表达载体的构建及表达 | 第97页 |
| ·木聚糖酶基因xynA 5’-翻译区和3’-翻译区同时缺失表达 | 第97-98页 |
| ·xynA12的PCR扩增 | 第97页 |
| ·原核表达载体pE-28a(+)-xynA12的构建及表达 | 第97-98页 |
| ·木聚糖酶基因xynA与xynA12结构比较 | 第98页 |
| ·结果和分析 | 第98-105页 |
| ·木聚糖酶基因xynA序列分析 | 第98-99页 |
| ·xynA核苷酸序列分析 | 第98页 |
| ·xynA氨基酸序列分析 | 第98-99页 |
| ·木聚糖酶基因xynA UTR的缺失表达 | 第99-100页 |
| ·木聚糖酶基因xynA5’-编码区的缺失表达 | 第100-101页 |
| ·木聚糖酶基因xynA3’-编码区的缺失表达 | 第101-102页 |
| ·木聚糖酶基因xynA 5’-编码区和3’-编码区的同时缺失表达 | 第102-104页 |
| ·木聚糖酶基因xynA与xynA12结构比较 | 第104-105页 |
| ·结论 | 第105-106页 |
| 第六章 全文结论 | 第106-108页 |
| ·木聚糖酶高产菌株的筛选及其快速纯化技术研究 | 第106页 |
| ·木聚糖酶基因xynA的克隆与高效表达 | 第106-107页 |
| ·木聚糖酶基因多样性研究 | 第107页 |
| ·木聚糖酶基因xynA的缺失表达 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-118页 |
| 附录 | 第118-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 作者简介 | 第128页 |
| 在读期间主要参与项目 | 第128-129页 |
