| 致谢 | 第4-10页 |
| 英文缩写词表 | 第10-11页 |
| 摘要 | 第11-14页 |
| 文献综述 | 第14-27页 |
| 1 盖他病毒及其危害 | 第14-23页 |
| 1.1 GETV的发现和分布 | 第14-17页 |
| 1.1.1 GETV的发现历史 | 第14-15页 |
| 1.1.2 GETV的分布 | 第15-17页 |
| 1.2 GETV的基本特征 | 第17-21页 |
| 1.2.1 病毒分类地位 | 第17-18页 |
| 1.2.2 病毒基本特征 | 第18-21页 |
| 1.2.3 遗传与变异 | 第21页 |
| 1.3 GETV的流行病学和致病性 | 第21-23页 |
| 1.3.1 可能的传播媒介和传播途径 | 第21-22页 |
| 1.3.2 感染谱 | 第22页 |
| 1.3.3 已报道的临床病例和致病性研究 | 第22-23页 |
| 1.3.4 致病性研究领域仍待解决的问题 | 第23页 |
| 2 盖他病毒检测方法研究进展 | 第23-27页 |
| 2.1 病毒分离与鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2 RT-PCR方法 | 第24页 |
| 2.2.1 单一RT-PCR | 第24页 |
| 2.2.2 多重RT-PCR | 第24页 |
| 2.3 血清学方法 | 第24-25页 |
| 2.3.1 病毒中和试验 | 第24-25页 |
| 2.3.2 酶联免疫吸附试验 | 第25页 |
| 2.3.3 血凝抑制试验 | 第25页 |
| 2.3.4 免疫荧光技术 | 第25页 |
| 2.4 其他检测方法 | 第25-26页 |
| 2.5 存在问题 | 第26-27页 |
| 试验一 猪盖他病毒RT-PCR方法的建立及其应用 | 第27-36页 |
| 1 材料与方法 | 第27-30页 |
| 1.1 毒株 | 第27页 |
| 1.2 试剂 | 第27页 |
| 1.3 核酸提取 | 第27-29页 |
| 1.3.1 临床病料中总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 1.3.2 DNA病毒核酸的提取 | 第28-29页 |
| 1.4 引物设计 | 第29页 |
| 1.5 RT-PCR检测 | 第29页 |
| 1.5.1 反转录 | 第29页 |
| 1.5.2 PCR反应条件的优化 | 第29页 |
| 1.5.3 cDNA模板用量的优化 | 第29页 |
| 1.5.4 PCR退火温度的优化 | 第29页 |
| 1.6 PCR产物纯化 | 第29-30页 |
| 1.7 特异性试验 | 第30页 |
| 1.8 敏感性试验 | 第30页 |
| 1.9 RT-PCR在临床上运用 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-35页 |
| 2.1 GETVRT-PCR扩增出特异序列 | 第30-31页 |
| 2.2 GETVRT-PCR具有良好特异性 | 第31页 |
| 2.3 RT-PCR引物退火温度适性广泛 | 第31-32页 |
| 2.4 GETVRT-PCR具有高度敏感性 | 第32-33页 |
| 2.5 RT-PCR从临床病例样品中检出GETV | 第33-34页 |
| 2.6 测序结果表明RT-PCR扩增产物为GETV基因序列 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 试验二 GETV、PEDV、TGEV、PoRV和PDCoV五重RT-PCR方法的建立及应用 | 第36-44页 |
| 1 材料与方法 | 第36-38页 |
| 1.1 毒株 | 第36页 |
| 1.2 试剂 | 第36页 |
| 1.3 核酸提取 | 第36页 |
| 1.4 引物设计 | 第36-37页 |
| 1.5 RT-PCR | 第37页 |
| 1.6 特异性试验 | 第37页 |
| 1.7 敏感性试验 | 第37-38页 |
| 1.8 重复性试验 | 第38页 |
| 1.9 多重RT-PCR在临床上运用 | 第38页 |
| 2 结果 | 第38-42页 |
| 2.1 多重RT-PCR特异性试验 | 第38-40页 |
| 2.2 多重RT-PCR敏感性试验 | 第40-41页 |
| 2.3 多重RT-PCR重复性试验 | 第41页 |
| 2.4 多重RT-PCR在临床上检测结果 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 试验三 猪盖他病毒Cap蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体制备 | 第44-51页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 1.1 细菌、毒株和实验动物 | 第44页 |
| 1.2 试剂 | 第44-45页 |
| 1.3 引物设计 | 第45页 |
| 1.4 RT-PCR扩增 | 第45页 |
| 1.5 构建原核表达质粒 | 第45页 |
| 1.6 重组质粒的诱导表达 | 第45页 |
| 1.7 纯化融合蛋白 | 第45-46页 |
| 1.8 制备多克隆抗体 | 第46页 |
| 1.9 多克隆抗体鉴定 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-49页 |
| 2.1 RT-PCR扩增产物 | 第46-47页 |
| 2.2 重组质粒的构建和鉴定 | 第47页 |
| 2.3 重组质粒pET28a-Cap的表达 | 第47页 |
| 2.4 融合蛋白纯化 | 第47-49页 |
| 2.5 抗血清的特异性检测 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 试验四 中国4省猪GETVNSP3及Cap基因检测及序列分析 | 第51-61页 |
| 1 材料与方法 | 第51-54页 |
| 1.1 样品来源 | 第51-52页 |
| 1.2 毒株、菌种和细胞 | 第52-53页 |
| 1.3 主要试剂 | 第53页 |
| 1.4 引物设计与合成 | 第53页 |
| 1.5 GETV核酸检测 | 第53页 |
| 1.6 基因克隆、测序与序列分析 | 第53-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-58页 |
| 2.1 801份样品中37份呈GETVNSP3和Cap基因RT-PCR阳性 | 第54-56页 |
| 2.2 NSP3和Cap基因序列特点 | 第56-58页 |
| 3 讨论 | 第58-61页 |
| 试验五 同一猪场疫苗源和猪源GETV分离株的比较分析 | 第61-73页 |
| 1 材料与方法 | 第61-65页 |
| 1.1 市售疫苗和猪源样品 | 第61页 |
| 1.2 毒株 | 第61页 |
| 1.3 试剂 | 第61页 |
| 1.4 引物设计 | 第61-63页 |
| 1.5 RNA提取 | 第63-64页 |
| 1.5.1 市售RNA病毒疫苗和病料RNA核酸的提取 | 第63-64页 |
| 1.5.2 细胞培养物RNA提取 | 第64页 |
| 1.6 病毒分离和鉴定 | 第64页 |
| 1.7 全基因组的克隆及测序 | 第64页 |
| 1.8 全基因组序列分析 | 第64-65页 |
| 2 结果 | 第65-69页 |
| 2.1 RT-PCR从临床病例样品和部分活疫苗中检出GETV | 第65-66页 |
| 2.2 其他实验室GETVRT-PCR扩增出特异序列 | 第66页 |
| 2.3 猪病料中检测出一份阳性GETV | 第66-67页 |
| 2.4 成功分离到2株GETV | 第67页 |
| 2.5 全基因序列特征 | 第67-69页 |
| 2.5.1 成功拼接出全基因序列 | 第67页 |
| 2.5.2 全基因核苷酸序列相似性 | 第67-68页 |
| 2.5.3 全基因推导的氨基酸序列相似性及特征 | 第68-69页 |
| 2.5.4 全基因序列的遗传进化特征 | 第69页 |
| 3 讨论 | 第69-73页 |
| 试验六 豫皖两省5株猪源GETV的分离鉴定及全序列分析 | 第73-83页 |
| 1 材料与方法 | 第73-74页 |
| 1.1 阳性样品来源 | 第73页 |
| 1.2 毒株、菌种和细胞 | 第73页 |
| 1.3 主要试剂 | 第73页 |
| 1.4 引物设计与合成 | 第73页 |
| 1.5 病毒分离和鉴定 | 第73-74页 |
| 1.6 基因克隆、测序与序列分析 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-80页 |
| 2.1 从阳性样品中成功分离到5株GETV | 第74-75页 |
| 2.2 5株GETV细胞培养物RT-PCR鉴定 | 第75页 |
| 2.3 全基因序列特征 | 第75-80页 |
| 2.3.1 成功拼接出全基因序列 | 第75-76页 |
| 2.3.2 全基因核苷酸序列相似性 | 第76页 |
| 2.3.3 全基因推导的氨基酸序列相似性及特征 | 第76-77页 |
| 2.3.4 全基因序列的遗传进化特征 | 第77-80页 |
| 3 讨论 | 第80-83页 |
| 全文总结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| ABSTRACT | 第90-94页 |
| 附作者读研期间研究成果 | 第95页 |
