| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第11-41页 |
| 第一节 MARCH蛋白研究进展 | 第11-21页 |
| 1.1.1 MARCH蛋白简介 | 第11-12页 |
| 1.1.2 病毒MARCH蛋白 | 第12-15页 |
| 1.1.3 胞内MARCH蛋白 | 第15-18页 |
| 1.1.4 MARCH蛋白的抗病毒功能 | 第18-19页 |
| 1.1.5 分选信号介导的跨膜蛋白转运 | 第19-21页 |
| 第二节 IAV介绍 | 第21-24页 |
| 1.2.1 IAV简介 | 第21-22页 |
| 1.2.2 流感病毒命名原则 | 第22页 |
| 1.2.3 IAV的结构以及生活周期 | 第22-24页 |
| 第三节 IAV离子通道蛋白M2的功能介绍 | 第24-28页 |
| 3.1.1 M2蛋白简介 | 第24页 |
| 3.1.2 M2离子通道的结构和功能 | 第24页 |
| 3.1.3 M2介导病毒vRNP释放 | 第24-25页 |
| 3.1.4 M2蛋白合成、翻译后修饰以及运输到细胞表面 | 第25页 |
| 3.1.5 M2蛋白四聚体的组装 | 第25-26页 |
| 3.1.6 M2蛋白的胞内定位及其对宿主细胞的影响 | 第26-27页 |
| 3.1.7 M2蛋白参与病毒出芽和切割 | 第27-28页 |
| 第四节 IAV非结构蛋白NS1的功能介绍 | 第28-33页 |
| 4.1.1 NS1蛋白简介 | 第28-29页 |
| 4.1.2 NS1蛋白抑制RIG-I信号轴 | 第29-30页 |
| 4.1.3 NS1蛋白限制宿主基因表达 | 第30-31页 |
| 4.1.4 NS1蛋白活化PI3K和调控凋亡应答 | 第31-32页 |
| 4.1.5 NS1蛋白通过C末端的PDZ结合模序结合胞内其它宿主蛋白 | 第32-33页 |
| 第五节 抑制IAV的宿主限制因子研究进展 | 第33-40页 |
| 5.1.1 干扰素诱导的跨膜蛋白 | 第34-37页 |
| 5.1.2 黏病毒限制蛋白鸟苷三磷酸酶 | 第37-40页 |
| 第六节 本研究的目的和意义 | 第40-41页 |
| 第二章 材料和方法 | 第41-63页 |
| 第一节 实验材料 | 第41-44页 |
| 2.1.1 细胞 | 第41页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第41-43页 |
| 2.1.2.1 基因克隆菌株 | 第41页 |
| 2.1.2.2 质粒 | 第41-43页 |
| 2.1.3 工具酶、抗体及试剂 | 第43页 |
| 2.1.4 分析软件 | 第43页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第43-44页 |
| 第二节 实验方法 | 第44-63页 |
| 2.2.1 常规质粒构建 | 第44-50页 |
| 2.2.2 定点突变质粒的构建 | 第50-53页 |
| 2.2.3 CRISPR-Cas9基因敲除质粒构建 | 第53-54页 |
| 2.2.4 细胞培养 | 第54-56页 |
| 2.2.5 细胞裂解 | 第56页 |
| 2.2.6 BCA法蛋白浓度定量 | 第56-57页 |
| 2.2.7 蛋白印迹(Western blotting) | 第57-59页 |
| 2.2.8 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation) | 第59页 |
| 2.2.9 生物统计分析 | 第59页 |
| 2.2.10 激光共聚焦成像(laser confocal imaging) | 第59-60页 |
| 2.2.11 病毒的制备与感染 | 第60-62页 |
| 2.2.12 细胞系的筛选 | 第62-63页 |
| 第三章 结果与分析 | 第63-82页 |
| 第一节 MARCH8抑制IAV复制及机制研究 | 第63-76页 |
| 3.1.1 过表达MARCH8抑制IAV复制 | 第63-64页 |
| 3.1.2 敲降内源性的MARCH8促进IAV复制 | 第64页 |
| 3.1.3 MARCH8不影响IAV包膜蛋白HA和NA表达 | 第64-66页 |
| 3.1.4 MARCH8下调包膜蛋白M2的表达 | 第66-67页 |
| 3.1.5 沉默内源性的MARCH8促进IAV感染后M2蛋白表达 | 第67-68页 |
| 3.1.6 MARCH8介导M2泛素化降解 | 第68-70页 |
| 3.1.7 MARCH8通过E3连接酶活性介导M2进入内吞体途径 | 第70-72页 |
| 3.1.8 构建M2蛋白胞内区赖氨酸突变体 | 第72页 |
| 3.1.9 M2胞内区的78位赖氨酸(K78)是MARCH8泛素化及介导其降解的关键位点 | 第72-74页 |
| 3.1.10 携带K78R突变的A/PR8/34病毒能够逃逸MARCH8降解M2的作用 | 第74-76页 |
| 第二节 IAV拮抗MARCH8作用及机制研究 | 第76-82页 |
| 3.2.1 过表达MARCH8不影响A/WSN/33病毒复制 | 第76-77页 |
| 3.2.2 过表达MARCH8对/WSN/33病毒M2表达没有影响 | 第77页 |
| 3.2.3 A/WSN/33病毒感染使MARCH8表达减少 | 第77-78页 |
| 3.2.4 A/WSN/33病毒的NS1下调MARCH8表达 | 第78-79页 |
| 3.2.5 A/WSN/33病毒NS1拮抗MARCH8降解M2的作用 | 第79-80页 |
| 3.2.6 A/WSN/33和A/PR8/34病毒NS1蛋白氨基酸序列比对 | 第80页 |
| 3.2.7 A/WSN的NS1拮抗MARCH8依赖其对CPSF30的结合能力 | 第80-82页 |
| 第四章 讨论 | 第82-85页 |
| 第一节 宿主抑制IAV复制的新策略 | 第82页 |
| 第二节 MARCH8介导M2降解及M2蛋白保守性分析 | 第82-84页 |
| 第三节 NS1对MARCH8的拮抗作用 | 第84-85页 |
| 第五章 结论与展望 | 第85-87页 |
| 第一节 结论 | 第85页 |
| 第二节 展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 附录A 英文缩略词表 | 第98-100页 |
| 附录B 个人简历 | 第100-101页 |
| 附录C 在学期间发表论文 | 第101页 |
