| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 前言 | 第11-27页 |
| 1.1 Tau蛋白相关的神经退行性疾病 | 第11-12页 |
| 1.1.1 Tau蛋白与阿尔茨海默症 | 第11页 |
| 1.1.2 Tau蛋白与FTDP- | 第11-12页 |
| 1.1.3 其他Tau蛋白相关疾病 | 第12页 |
| 1.2 Tau蛋白 | 第12-15页 |
| 1.2.1 Tau蛋白的结构 | 第12-14页 |
| 1.2.2 Tau蛋白的生理功能 | 第14页 |
| 1.2.3 Tau蛋白的异常修饰 | 第14-15页 |
| 1.2.4 基因突变对Tau蛋白功能的影响 | 第15页 |
| 1.3 Tau蛋白的纤维化研究 | 第15-20页 |
| 1.3.1 Tau蛋白的纤维化过程 | 第16-17页 |
| 1.3.2 Tau蛋白纤维的核心结构 | 第17-19页 |
| 1.3.3 肝素与Tau蛋白的纤维化 | 第19-20页 |
| 1.4 微管蛋白与微管的组装 | 第20-23页 |
| 1.4.1 Tubulin的结构 | 第20-22页 |
| 1.4.2 微管的组装 | 第22页 |
| 1.4.3 Tau蛋白与Tubulin的相互作用 | 第22-23页 |
| 1.5 分子模拟技术的应用及研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5.1 分子模拟技术的简介 | 第23页 |
| 1.5.2 分子模拟在生命科学研究中的应用 | 第23-24页 |
| 1.6 本工作的研究目的和主要研究内容 | 第24-27页 |
| 1.6.1 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 Tau蛋白基因定点突变及表达纯化 | 第27-41页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第27-29页 |
| 2.1.1 质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 仪器 | 第28页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-34页 |
| 2.2.1 Tau蛋白基因的定点突变 | 第29-31页 |
| 2.2.2 Tau突变型质粒的扩增与鉴定 | 第31页 |
| 2.2.3 目的基因的转导与菌体的保种 | 第31-32页 |
| 2.2.4 Tauk18蛋白的表达 | 第32-33页 |
| 2.2.5 Tauk18蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| 2.3 实验结果及分析 | 第34-39页 |
| 2.3.1 PCR定点突变的结果 | 第34-35页 |
| 2.3.2 表达条件探索结果 | 第35-37页 |
| 2.3.3 样品不同前处理方法比较 | 第37-38页 |
| 2.3.4 HPLC法对蛋白纯化的结果 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 突变型Tau蛋白对自身纤维化的影响 | 第41-56页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第41-42页 |
| 3.1.1 蛋白 | 第41页 |
| 3.1.2 试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 仪器 | 第41-42页 |
| 3.1.4 试剂配制 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-47页 |
| 3.2.1 Tau蛋白自身纤维化模型的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.2 不同突变型Tau蛋白自身纤维化动力学比较 | 第43-44页 |
| 3.2.3 Tauk18蛋白纤维化产物的电泳鉴别 | 第44页 |
| 3.2.4 透射电镜观察不同突变型Tau蛋白纤维的结构 | 第44-45页 |
| 3.2.5 不同pH值对Tauk18自身纤维化的影响 | 第45-46页 |
| 3.2.6 DTT对Tau蛋白自身纤维化的影响 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果及分析 | 第47-55页 |
| 3.3.1 不同浓度的肝素钠对Tauk18自身纤维化的动力学影响 | 第47-48页 |
| 3.3.2 Tauk18蛋白BCA定量结果 | 第48-49页 |
| 3.3.3 不同突变型Tauk18蛋白纤维化动力学比较结果 | 第49-50页 |
| 3.3.4 取样不同Tauk18蛋白单体与纤维的电泳结果 | 第50-51页 |
| 3.3.5 透射电镜拍摄不同突变型Tauk18蛋白纤维的结果 | 第51-52页 |
| 3.3.6 不同pH值对Tauk18自身纤维化的影响 | 第52-54页 |
| 3.3.7 DTT对Tau蛋白自身纤维化的影响 | 第54-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-56页 |
| 第四章 突变型Tau蛋白对微管组装动力学的影响 | 第56-69页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第56-57页 |
| 4.1.1 蛋白 | 第56页 |
| 4.1.2 试剂 | 第56页 |
| 4.1.3 仪器 | 第56-57页 |
| 4.1.4 试剂配制 | 第57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-60页 |
| 4.2.1 微管组装模型的建立 | 第57-59页 |
| 4.2.2 不同突变型Tauk18蛋白对微管组装动力学的影响 | 第59-60页 |
| 4.2.3 电泳鉴别微管组装反应产物 | 第60页 |
| 4.3 实验结果及分析 | 第60-68页 |
| 4.3.1 微管组装模型的建立 | 第60-62页 |
| 4.3.2 不同突变型Tauk18蛋白对微管组装动力学影响 | 第62-67页 |
| 4.3.3 电泳鉴别微管组装反应产物 | 第67-68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-69页 |
| 第五章 Tau蛋白与Tubulin结合的分子动力学模拟 | 第69-90页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第69页 |
| 5.1.1 模拟体系 | 第69页 |
| 5.1.2 分子动力学模拟运行的服务器 | 第69页 |
| 5.2 实验方法 | 第69-73页 |
| 5.2.1 Tauk18同源建模 | 第69-71页 |
| 5.2.2 Tubulin同源建模 | 第71-72页 |
| 5.2.3 Tauk18与Tubulin的分子对接与分子动力学模拟 | 第72-73页 |
| 5.2.4 Tauk18与Tubulin结合的自由能计算 | 第73页 |
| 5.3 实验结果及分析 | 第73-86页 |
| 5.3.1 Tauk18同源建模的结果 | 第73-75页 |
| 5.3.2 Tubulin同源建模的结果 | 第75-76页 |
| 5.3.3 Tauk18与Tubulin分子对接的模型 | 第76-77页 |
| 5.3.4 Tauk18与Tubulin的结合自由能 | 第77页 |
| 5.3.5 Tubulin-Tau(K257T)复合物的分子动力学模拟 | 第77-79页 |
| 5.3.6 Tubulin-Tau(N279K)复合物的分子动力学模拟 | 第79-81页 |
| 5.3.7 Tubulin-Tau(P301L)复合物的分子动力学模拟 | 第81-83页 |
| 5.3.8 Tubulin-Tau(K317M)复合物的分子动力学模拟 | 第83-85页 |
| 5.3.9 Tubulin-Tau(V337M)复合物的分子动力学模拟 | 第85-86页 |
| 5.4 讨论 | 第86-90页 |
| 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 附录A Tauk18及突变型的氨基酸序列 | 第99-101页 |
| 附录B Tubulin单体的氨基酸序列 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第103页 |
