| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第1章 文献综述 | 第8-28页 |
| 1.1 单核苷酸多态性 | 第8-9页 |
| 1.1.1 单核苷酸多态性简介 | 第8页 |
| 1.1.2 单核苷酸多态性的研究意义 | 第8-9页 |
| 1.2 常见的核酸序列检测技术 | 第9-17页 |
| 1.2.1 荧光定量PCR技术 | 第9-12页 |
| 1.2.2 测序技术 | 第12-15页 |
| 1.2.3 恒温扩增技术 | 第15-17页 |
| 1.3 杂交探针技术的现状 | 第17-23页 |
| 1.3.1 杂交介导的单核苷酸变异检测 | 第17-20页 |
| 1.3.2 蛋白介导的单核苷酸变异检测 | 第20-22页 |
| 1.3.3 热变性介导的单核苷酸变异检测 | 第22-23页 |
| 1.4 基于DNA连接酶的检测技术 | 第23-25页 |
| 1.4.1 连接酶检测反应(LDR) | 第24页 |
| 1.4.2 连接酶链式反应(LCR) | 第24-25页 |
| 1.4.3 锁式探针(Padlock Probe) | 第25页 |
| 1.5 本课题研究内容和思路 | 第25-28页 |
| 第2章 材料与方法 | 第28-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 DNA序列 | 第28页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.4 溶液的配制 | 第30页 |
| 2.2 RNA的制备方法 | 第30-35页 |
| 2.2.1 质粒的克隆与转化 | 第30-33页 |
| 2.2.2 转录模板的制备 | 第33页 |
| 2.2.3 RNA转录及产物纯化 | 第33-35页 |
| 2.3 单链环状DNA制备方法 | 第35-36页 |
| 2.3.1 探针磷酸化 | 第35页 |
| 2.3.2 DNA-DNA连接和酶切反应 | 第35-36页 |
| 2.3.3 DNA-RNA连接与酶切反应 | 第36页 |
| 2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第36-37页 |
| 2.5 吉布斯自由能的计算 | 第37-38页 |
| 第3章 单位点变异的DNA检测 | 第38-56页 |
| 3.1 环状DNA形成条件优化 | 第38-42页 |
| 3.1.1 前言与背景 | 第38页 |
| 3.1.2 探针和连接模板浓度优化 | 第38-40页 |
| 3.1.3 酶反应条件优化 | 第40-41页 |
| 3.1.4 结果与讨论 | 第41-42页 |
| 3.2 最佳错配位点的确认 | 第42-46页 |
| 3.2.1 前言与背景 | 第42页 |
| 3.2.2 引入错配位点的可行性 | 第42-43页 |
| 3.2.3 最佳错配位点的确认 | 第43-45页 |
| 3.2.4 结果与讨论 | 第45-46页 |
| 3.3 检测位点5端错配的检测效果 | 第46-52页 |
| 3.3.1 前言与背景 | 第46页 |
| 3.3.2 T4 DNA连接酶介导的连接反应 | 第46-50页 |
| 3.3.3 Taq DNA连接酶介导的连接反应 | 第50-52页 |
| 3.3.4 结果与讨论 | 第52页 |
| 3.4 检测位点3端错配的检测效果 | 第52-56页 |
| 3.4.1 前言与背景 | 第52页 |
| 3.4.2 连接成环率和区分度分析 | 第52-55页 |
| 3.4.3 结果与讨论 | 第55-56页 |
| 第4章 单位点变异的RNA检测 | 第56-72页 |
| 4.1 转录模板的制备优化 | 第56-60页 |
| 4.1.1 前言与背景 | 第56页 |
| 4.1.2 PCR条件的优化 | 第56-58页 |
| 4.1.3 PCR引物的优化 | 第58-59页 |
| 4.1.4 RNA转录模板的制备 | 第59页 |
| 4.1.5 结果与讨论 | 第59-60页 |
| 4.2 RNA转录与纯化 | 第60-62页 |
| 4.2.1 前言与背景 | 第60-61页 |
| 4.2.2 聚丙烯酰胺凝胶的优化 | 第61-62页 |
| 4.2.3 结果与讨论 | 第62页 |
| 4.3 环状DNA形成条件的优化 | 第62-67页 |
| 4.3.1 前言与背景 | 第62页 |
| 4.3.2 连接酶加入量及RNA加入量的优化 | 第62-64页 |
| 4.3.3 连接反应条件的优化 | 第64-66页 |
| 4.3.4 结果与讨论 | 第66-67页 |
| 4.4 RNA点突变检测 | 第67-72页 |
| 4.4.1 前言与背景 | 第67页 |
| 4.4.2 不同位点错配的影响 | 第67-70页 |
| 4.4.3 结果与分析 | 第70-72页 |
| 第5章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 结论 | 第72页 |
| 5.2 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 附录 | 第82-88页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90页 |