| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 人手足口病 | 第9-10页 |
| 1.2 肠道病毒71型 | 第10-12页 |
| 1.2.1 EV71病毒颗粒结构 | 第10-11页 |
| 1.2.2 EV71编码区蛋白的结构和功能 | 第11-12页 |
| 1.3 EV71疫苗和抗EV71药物的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.3.1 EV71疫苗的研究历史和最新进展 | 第12-13页 |
| 1.3.2 抗EV71药物的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 论文的研究思路与意义 | 第14-15页 |
| 第二章 EV71-GFP重组病毒的构建 | 第15-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 质粒与细胞 | 第15页 |
| 2.1.2 试剂与试剂盒 | 第15页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-23页 |
| 2.2.1 转化,并提取质粒 | 第16-17页 |
| 2.2.2 体外转录,并纯化RNA | 第17-19页 |
| 2.2.3 贴壁细胞的复苏、传代与冻存 | 第19-20页 |
| 2.2.4 转染并收集EV71-GFP病毒颗粒 | 第20-21页 |
| 2.2.5 人横纹肌肉瘤细胞RD的扩大培养与逐级感染 | 第21页 |
| 2.2.6 CsCl密度梯度离心法提纯浓缩EV71-GFP | 第21-22页 |
| 2.2.7 测定病毒滴度 | 第22-23页 |
| 2.3 实验结果及分析 | 第23-25页 |
| 2.3.1 CsCl梯度离心提纯浓缩EV71-GFP的结果 | 第23页 |
| 2.3.2 EV71-GFP滴度测定的结果 | 第23-25页 |
| 第三章 EV71的易感肠部位和所受肠吸收药剂影响的检测 | 第25-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 3.1.1 病毒、细胞与乳鼠 | 第25页 |
| 3.1.2 主要试剂与试剂盒 | 第25-26页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-39页 |
| 3.2.1 口腔灌喂乳鼠病毒 | 第27-28页 |
| 3.2.2 Quantitative real-time PCR检测EV71在小肠三部位中的动态分布 | 第28-31页 |
| 3.2.3 免疫组化检测肠不同部位中的EV71感染情况及SCARB_2受体分布 | 第31-32页 |
| 3.2.4 EV71-GFP感染三种肠细胞后,定性观察感染情况 | 第32页 |
| 3.2.5 流式细胞术定量测定三种细胞的感染情况 | 第32-33页 |
| 3.2.6 基因敲除三种肠细胞中的SCARB_2受体基因 | 第33-35页 |
| 3.2.7 WB验证敲除结果并检测感染后三种肠细胞中的VP1表达 | 第35-37页 |
| 3.2.8 口腔灌喂乳鼠肠吸收药剂 | 第37-38页 |
| 3.2.9 Quantitative real-time检测给药后乳鼠小肠感染EV71的变化情况 | 第38-39页 |
| 3.2.10 WB检测给药后三种肠细胞中VP1和SCARB_2的表达情况 | 第39页 |
| 3.3 实验结果及分析 | 第39-48页 |
| 3.3.1 Quantitative real-time PCR检测EV71在小肠中的动态分布结果与分析 | 第39-40页 |
| 3.3.2 免疫组化检测肠不同部位中的EV71感染情况及SCARB_2受体分布的结果 | 第40-42页 |
| 3.3.3 荧光显微镜定性观察结果 | 第42-43页 |
| 3.3.4 流式细胞术定量测定结果 | 第43-44页 |
| 3.3.5 WB检测三种肠细胞感染EV71后病毒含量变化的结果 | 第44-45页 |
| 3.3.6 Quantitative real-time检测肠吸收药剂影响的结果(体内水平) | 第45-46页 |
| 3.3.7 WB的检测肠吸收药剂影响的结果(细胞水平) | 第46-48页 |
| 第四章 EV71感染后,与免疫系统相互作用因子的表达变化 | 第48-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 4.1.1 病毒与细胞 | 第48页 |
| 4.1.2 主要试剂与试剂盒 | 第48-49页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第49页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-54页 |
| 4.2.1 流式细胞术测定三种细胞凋亡时间点 | 第49-50页 |
| 4.2.2 Quantitative real-time检测EV71感染后免疫细胞招募因子的变化 | 第50-53页 |
| 4.2.3 WB检测免疫细胞招募因子在蛋白水平上的变化 | 第53-54页 |
| 4.3 实验结果及分析 | 第54-58页 |
| 4.3.1 Quantitative real-time PCR测定的结果 | 第54-56页 |
| 4.3.2 WB检测结果 | 第56-58页 |
| 第五章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58页 |
| 5.2 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 已发表及待发表科研成果 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
