| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-31页 |
| 1.1 金属β-内酰胺酶 | 第14-18页 |
| 1.1.1 金属β-内酰胺酶与细菌耐药问题 | 第14-16页 |
| 1.1.2 金属β-内酰胺酶的分类 | 第16-18页 |
| 1.1.3 金属β-内酰胺酶的催化机制 | 第18页 |
| 1.2 中草药活性成分用于细菌耐药的研究 | 第18-20页 |
| 1.3 金属β-内酰胺酶与配体相互作用的研究方法 | 第20-30页 |
| 1.3.1 紫外吸收光谱法 | 第21页 |
| 1.3.2 荧光光谱分析法 | 第21-23页 |
| 1.3.2.1 荧光猝灭光谱 | 第21-22页 |
| 1.3.2.2 同步荧光分析法 | 第22-23页 |
| 1.3.2.3 三维光谱技术 | 第23页 |
| 1.3.3 亲和色谱分析法 | 第23-24页 |
| 1.3.4 计算机模拟技术 | 第24-30页 |
| 1.3.4.1 蛋白质-配体结合机制模型 | 第24页 |
| 1.3.4.2 分子对接 | 第24-25页 |
| 1.3.4.3 分子动力学 | 第25页 |
| 1.3.4.4 联合使用分子对接和分子动力学技术 | 第25-26页 |
| 1.3.4.5 分子力场 | 第26-28页 |
| 1.3.4.6 锌酶力场 | 第28-30页 |
| 1.4 本论文研究内容及意义 | 第30-31页 |
| 第二章 MβL制备及抗生素诱导的MβL构象变化研究 | 第31-43页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 实验试剂及仪器 | 第31-32页 |
| 2.2.1 菌种 | 第31页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-34页 |
| 2.3.1 CphA和FEZ的诱导表达 | 第32-33页 |
| 2.3.2 CphA酶的分离纯化 | 第33页 |
| 2.3.3 FEZ包涵体的复性 | 第33页 |
| 2.3.4 MβL的活性表征 | 第33页 |
| 2.3.5 MβL与抗生素底物相互作用的同步荧光光谱 | 第33-34页 |
| 2.3.6 MβL与抗生素底物相互作用的三维荧光光谱 | 第34页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第34-41页 |
| 2.4.1 CphA和FEZ的制备 | 第34-35页 |
| 2.4.2 MβL与抗生素相互作用的同步荧光光谱分析 | 第35-39页 |
| 2.4.3 MβL与抗生素相互作用的三维荧光光谱分析 | 第39-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 MβL与双环β-内酰胺抗生素及其水解产物相互作用的分子动力学研究 | 第43-87页 |
| 3.1 MβL与双环β-内酰胺抗生素相互作用的分子动力学研究 | 第43-70页 |
| 3.1.1 引言 | 第43-45页 |
| 3.1.2 计算方法 | 第45-47页 |
| 3.1.2.1 分子对接 | 第45页 |
| 3.1.2.2 分子动力学模拟 | 第45-46页 |
| 3.1.2.3 模拟结果分析 | 第46-47页 |
| 3.1.3 结果与讨论 | 第47-70页 |
| 3.1.3.1 分子对接 | 第47-49页 |
| 3.1.3.2 模拟体系的稳定性 | 第49-52页 |
| 3.1.3.3 MβL与其抗生素底物的结合模式分析 | 第52-54页 |
| 3.1.3.4 MβL结构的柔性及抗生素与其结合时的诱导契合效应 | 第54-61页 |
| 3.1.3.5 空载MβL和抗生素结合MβL的结构比较 | 第61-64页 |
| 3.1.3.6 相关性分析 | 第64-67页 |
| 3.1.3.7 结合自由能的计算 | 第67-70页 |
| 3.2 MβL与双环β-内酰胺抗生素水解产物的分子动力学模拟 | 第70-84页 |
| 3.2.1 引言 | 第70页 |
| 3.2.2 计算方法 | 第70-72页 |
| 3.2.2.1 分子对接 | 第70-71页 |
| 3.2.2.2 分子动力学模拟 | 第71页 |
| 3.2.2.3 模拟结果分析 | 第71-72页 |
| 3.2.3 结果与讨论 | 第72-84页 |
| 3.2.3.1 模拟体系的稳定性 | 第72-77页 |
| 3.2.3.2 MβL与其抗生素水解产物的结合模式分析 | 第77-80页 |
| 3.2.3.3 空载MβL和抗生素水解产物结合MβL的结构比较 | 第80-82页 |
| 3.2.3.4 结合自由能的计算 | 第82-84页 |
| 3.3 本章小结 | 第84-87页 |
| 第四章 MβL与单环β-内酰胺抗生素氨曲南之间的相互作用研究 | 第87-100页 |
| 4.1 引言 | 第87-88页 |
| 4.2 实验试剂及仪器 | 第88页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第88页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第88页 |
| 4.3 实验方法 | 第88-89页 |
| 4.3.1 Azt与三种MβL的酶学活性测定 | 第88页 |
| 4.3.2 Azt与三种MβL紫外吸收光谱的测定 | 第88页 |
| 4.3.3 Azt与三种MβL荧光发射光谱的测定 | 第88页 |
| 4.3.4 Azt与三种MβL同步荧光光谱的测定 | 第88-89页 |
| 4.3.5 Azt与三种MβL三维荧光光谱的测定 | 第89页 |
| 4.3.6 分子对接 | 第89页 |
| 4.4 结果和讨论 | 第89-99页 |
| 4.4.1 Azt与三种MβL的酶活性分析 | 第89页 |
| 4.4.2 Azt与三种MβL的紫外吸收光谱分析 | 第89-91页 |
| 4.4.3 Azt与三种MβL的荧光发射光谱分析 | 第91-93页 |
| 4.4.3.1 荧光发射光谱 | 第91页 |
| 4.4.3.2 荧光猝灭机制和结合参数 | 第91-93页 |
| 4.4.4 Azt与三种MβL的同步荧光光谱分析 | 第93-95页 |
| 4.4.5 Azt与三种MβL的三维荧光光谱分析 | 第95页 |
| 4.4.6 分子对接分析 | 第95-99页 |
| 4.5 本章小结 | 第99-100页 |
| 第五章 MβL在抗生素选择压力下的进化 | 第100-109页 |
| 5.1 引言 | 第100页 |
| 5.2 实验试剂及仪器 | 第100-101页 |
| 5.2.1 菌种 | 第100-101页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第101页 |
| 5.2.3 主要仪器 | 第101页 |
| 5.3 实验方法 | 第101-102页 |
| 5.3.1 实验设计 | 第101-102页 |
| 5.3.2 DNA序列测定 | 第102页 |
| 5.3.3 CphA酶分离纯化及活性测定 | 第102页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第102-107页 |
| 5.4.1 CphA菌在BIA培养基中的迁移分析 | 第102-104页 |
| 5.4.2 CphA基因在BIA选择压力下的变异分析 | 第104-106页 |
| 5.4.3 变异CphA酶的活性及结构分析 | 第106-107页 |
| 5.4.4 单环β-内酰胺母核可作为开发抗MβL水解的新型抗生素骨架 | 第107页 |
| 5.5 本章小结 | 第107-109页 |
| 第六章 固定化MβL色谱柱及其应用 | 第109-118页 |
| 6.1 引言 | 第109页 |
| 6.2 实验试剂及仪器 | 第109-110页 |
| 6.2.1 主要试剂 | 第109-110页 |
| 6.2.2 主要仪器 | 第110页 |
| 6.3 实验方法 | 第110-112页 |
| 6.3.1 非定向固定化MβL酶填料的制备 | 第110页 |
| 6.3.2 MβL酶色谱柱用于MβL与药物分子的相互作用研究 | 第110页 |
| 6.3.3 MβL酶色谱柱在简单体系中的测试 | 第110-111页 |
| 6.3.4 五味子乙醇提取物的制备 | 第111页 |
| 6.3.5 五味子提取物活性成分筛选 | 第111页 |
| 6.3.6 五味子提取物活性保留成分的定性分析 | 第111-112页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第112-117页 |
| 6.4.1 MβL色谱柱的保留行为研究 | 第112页 |
| 6.4.2 MβL酶和药物分子相互作用的前沿色谱分析 | 第112-113页 |
| 6.4.3 MβL酶色谱柱在简单体系中的测试 | 第113-114页 |
| 6.4.4 BcII色谱柱筛选五味子提取物 | 第114页 |
| 6.4.5 五味子提取物定性分析 | 第114-116页 |
| 6.4.6 分子对接法验证 | 第116-117页 |
| 6.5 本章小结 | 第117-118页 |
| 小结与展望 | 第118-120页 |
| 参考文献 | 第120-137页 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138页 |
