| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-34页 |
| 1 迟缓爱德华氏菌 | 第14-21页 |
| 1.1 迟缓爱德华氏菌的基本生物学特征 | 第14-15页 |
| 1.2 迟缓爱德华氏菌的感染途径 | 第15-16页 |
| 1.3 迟缓爱德华氏菌的毒力因子 | 第16-21页 |
| 1.3.1 Ⅲ型和Ⅵ型分泌系统 | 第16-18页 |
| 1.3.2 群体感应 | 第18页 |
| 1.3.3 双组分系统 | 第18-20页 |
| 1.3.4 铁离子吸收调节蛋白 | 第20-21页 |
| 2 Ⅲ型分泌系统注射器装置 | 第21-27页 |
| 2.1 T3SS分类 | 第21-22页 |
| 2.2 T3SS结构 | 第22-27页 |
| 2.2.1 基体 | 第24-25页 |
| 2.2.2 输出装置 | 第25页 |
| 2.2.3 针状纤维 | 第25-26页 |
| 2.2.4 针状纤维顶端复合物和输送器孔 | 第26-27页 |
| 3 Ⅲ型分泌系统分泌的内部条件与底物分泌的调控 | 第27-33页 |
| 3.1 T3SS分泌的内部条件 | 第27-28页 |
| 3.1.1 信号肽和分子伴侣 | 第27页 |
| 3.1.2 T3SS的能量来源 | 第27-28页 |
| 3.1.3 分泌平台 | 第28页 |
| 3.2 T3SS底物分泌的调控 | 第28-33页 |
| 3.2.1 耶尔森氏菌的YopN-TyeA | 第29-30页 |
| 3.2.2 志贺氏菌的MxiC | 第30页 |
| 3.2.3 假单胞菌的HrpJ | 第30-31页 |
| 3.2.4 衣原体的CopN | 第31页 |
| 3.2.5 沙门氏菌的SPI-1InvE | 第31-32页 |
| 3.2.6 沙门氏菌的SPI-2SsaL | 第32页 |
| 3.2.7 大肠杆菌的SepL | 第32-33页 |
| 4 本研究的内容和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 EsaL促进输送器蛋白分泌 | 第34-47页 |
| 1 前言 | 第34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-38页 |
| 2.1 培养基和生长条件 | 第34页 |
| 2.2 菌株、质粒和引物 | 第34-36页 |
| 2.3 ΔesaL序列缺失部位确认 | 第36页 |
| 2.4 ΔesaL互补株构建 | 第36页 |
| 2.5 胞外蛋白和全菌蛋白的提取 | 第36-37页 |
| 2.6 Ca~(2+)和pH对E.tarda T3SS蛋白表达和分泌的影响 | 第37页 |
| 2.7 细菌细胞分相 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-44页 |
| 3.1 ΔesaL缺失EsaL的40-366位氨基酸 | 第38页 |
| 3.2 ΔesaL互补株构建 | 第38-39页 |
| 3.3 EsaL促进输送器蛋白分泌 | 第39-44页 |
| 3.3.1 EsaL是一种胞内蛋白 | 第39页 |
| 3.3.2 EsaL促进输送器蛋白分泌 | 第39-44页 |
| 3.3.3 互补株过量表达EsaL抑制效应分子分泌 | 第44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 EsaB/EsaL/EsaM复合物控制T3SS输送器蛋白和效应分子分泌 | 第47-66页 |
| 1 前言 | 第47-48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-54页 |
| 2.1 生物信息学分析 | 第48页 |
| 2.2 细菌、质粒和引物 | 第48-52页 |
| 2.3 esaB和esaM缺失突变株构建 | 第52页 |
| 2.4 T3SS蛋白表达和分泌 | 第52-53页 |
| 2.5 酵母双杂交 | 第53页 |
| 2.6 免疫共沉淀 | 第53-54页 |
| 2.7 蛋白稳定性实验 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-64页 |
| 3.1 生物信息学分析结果 | 第54页 |
| 3.2 EsaB和EsaM促进输送器蛋白分泌 | 第54-56页 |
| 3.3 EsaL与EsaB和EsaM相互作用 | 第56-58页 |
| 3.4 EsaB和EsaM是胞内蛋白且两者互相稳定 | 第58-61页 |
| 3.5 EsaL在pH由酸性向中性变化时抑制效应分子EseG分泌 | 第61-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 EsaL是迟缓爱德华氏菌的毒力因子 | 第66-75页 |
| 1 前言 | 第66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-69页 |
| 2.1 细菌和质粒 | 第66-67页 |
| 2.2 细胞和实验动物 | 第67页 |
| 2.3 实验方法 | 第67-69页 |
| 2.3.1 腺苷酸环化酶活性测定 | 第67-68页 |
| 2.3.2 乳酸脱氢酶活性测定 | 第68页 |
| 2.3.3 半数致死量测定 | 第68页 |
| 2.3.4 存活曲线 | 第68页 |
| 2.3.5 竞争感染 | 第68-69页 |
| 2.3.6 统计学分析 | 第69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-73页 |
| 3.1 EsaL不影响效应分子进入宿主细胞 | 第69-70页 |
| 3.2 EsaB和EsaM促进效应分子进入宿主细胞 | 第70页 |
| 3.3 EsaL不影响E.tarda的细胞毒性 | 第70-71页 |
| 3.4 esaL缺失导致E.tarda半数致死量升高 | 第71-72页 |
| 3.5 esaB和esaM缺失导致E.tarda毒力下降 | 第72页 |
| 3.6 ΔesaL、ΔesaB和ΔesaM的毒性强弱比较 | 第72-73页 |
| 4.讨论 | 第73-75页 |
| 第五章 EsaL感受pH变化和促进效应分子分泌的作用及EsaK和EsaE与EsaL的互作初步研究 | 第75-84页 |
| 1 前言 | 第75页 |
| 2 材料与方法 | 第75-78页 |
| 2.1 菌株、质粒和引物 | 第75-78页 |
| 2.2 培养基pH值变化影响T3SS蛋白表达和分泌 | 第78页 |
| 2.3 酵母双杂交 | 第78页 |
| 3 结果与分析 | 第78-82页 |
| 3.1 EsaL感受pH变化且促进效应分子分泌 | 第78-80页 |
| 3.2 EsaK、EsaE是EsaL的互作蛋白 | 第80-82页 |
| 4 讨论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-103页 |
| 附录 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
