| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 流感病毒简介 | 第11-12页 |
| 1.2 流感病毒与细胞凋亡 | 第12-15页 |
| 1.2.1 细胞凋亡 | 第12-13页 |
| 1.2.2 流感病毒诱导细胞凋亡 | 第13-15页 |
| 1.3 流感病毒与Ⅰ型干扰素 | 第15-18页 |
| 1.3.1 Ⅰ型干扰素(IFNα/β)的产生与应答 | 第15-16页 |
| 1.3.2 Ⅰ型干扰素(IFNα/β)的抗流感病毒作用 | 第16页 |
| 1.3.3 流感病毒对干扰素的抑制作用 | 第16-18页 |
| 1.4 PHB家族简介 | 第18-23页 |
| 1.4.1 PHB家族的组成 | 第18页 |
| 1.4.2 PHB家族蛋白结构 | 第18-19页 |
| 1.4.3 PHB复合物定位 | 第19-20页 |
| 1.4.4 PHB维持线粒体的发育与功能 | 第20页 |
| 1.4.5 PHB调节细胞凋亡 | 第20页 |
| 1.4.6 PHB与E2F/Rb | 第20-21页 |
| 1.4.7 PHB与p53 | 第21页 |
| 1.4.8 参与IL6 JAK-STAT通路 | 第21页 |
| 1.4.9 参与Raf-MEK-ERK通路 | 第21-23页 |
| 2 研究目的与意义 | 第23页 |
| 3 材料与方法 | 第23-35页 |
| 3.1 材料 | 第23-26页 |
| 3.1.1 质粒、菌株和病毒 | 第23页 |
| 3.1.2 细胞培养,转染相关试剂 | 第23页 |
| 3.1.3 细菌培养基及抗生素的配制 | 第23-24页 |
| 3.1.4 主要酶和试剂盒 | 第24页 |
| 3.1.5 RNA抽提及荧光定量试剂 | 第24页 |
| 3.1.6 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western Blot相关试剂 | 第24-25页 |
| 3.1.7 抗体 | 第25页 |
| 3.1.8 主要分子生物学软件及数据库 | 第25页 |
| 3.1.9 主要实验仪器及设备 | 第25-26页 |
| 3.2 方法 | 第26-35页 |
| 3.2.1 PCR的扩增、产物的纯化回收、载体连接及测序 | 第26-28页 |
| 3.2.2 去内毒素质粒的提取 | 第28-29页 |
| 3.2.3 病毒蚀斑实验 | 第29-30页 |
| 3.2.4 人肺泡上皮细胞(A549)的培养 | 第30页 |
| 3.2.5 A549细胞的感染实验 | 第30页 |
| 3.2.6 A549细胞的转染 | 第30-31页 |
| 3.2.7 293T细胞的转染 | 第31页 |
| 3.2.8 细胞总RNA的提取及DNase处理 | 第31-32页 |
| 3.2.9 总RNA的反转录 | 第32页 |
| 3.2.10 SYBR green Real-time RT-PCR | 第32-33页 |
| 3.2.11 Real-time RT-PCR数据分析 | 第33页 |
| 3.2.12 Western blot蛋白样品的制备 | 第33页 |
| 3.2.13 考马斯亮蓝G250染色液蛋白定量法 | 第33-34页 |
| 3.2.14 Western blot | 第34页 |
| 3.2.15 间接免疫荧光 | 第34页 |
| 3.2.16 双荧光素酶活性检测 | 第34-35页 |
| 3.2.17 统计学方法 | 第35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-49页 |
| 4.1 H5N1禽流感DW毒株病毒滴度的测定 | 第35页 |
| 4.2 H5N1禽流感病毒感染A549细胞对PHB mRNA水平的影响 | 第35-36页 |
| 4.3 H5N1禽流感病毒感染A549细胞对PHB蛋白水平的影响 | 第36-37页 |
| 4.4 PHB对H5N1禽流感病毒增殖的影响 | 第37-41页 |
| 4.4.1 真核表达质粒pCMV-PHB的构建及表达效果验证 | 第37-39页 |
| 4.4.2 PHB促进A549细胞内病毒蛋白的合成 | 第39-41页 |
| 4.4.3 病毒蚀斑实验检测上清中的病毒滴度 | 第41页 |
| 4.5 PHB亚细胞定位研究 | 第41-43页 |
| 4.6 PHB对A549细胞凋亡的影响 | 第43-44页 |
| 4.7 PHB对Ⅰ型干扰素应答通路的影响 | 第44-49页 |
| 4.7.1 pCMV-PHB在293T细胞上的表达效果验证 | 第44-45页 |
| 4.7.2 双荧光素酶检测PHB对IFNβ启动子活性的影响 | 第45-46页 |
| 4.7.3 双荧光素酶检测PHB对ISRE启动子活性的影响 | 第46页 |
| 4.7.4 Real -time RT-PCR检测PHB对ISGs表达的影响 | 第46-47页 |
| 4.7.5 PHB抑制STAT1和STAT2的表达 | 第47-49页 |
| 5 讨论 | 第49-51页 |
| 5.1 H5N1禽流感病毒感染对PHB表达的影响 | 第49页 |
| 5.2 PHB对H5N1禽流感病毒增殖的影响 | 第49页 |
| 5.3 PHB亚细胞定位研究 | 第49-50页 |
| 5.4 PHB对A549细胞凋亡的影响 | 第50页 |
| 5.5 PHB对Ⅰ型干扰素应答通路的影响 | 第50-51页 |
| 6 小结 | 第51-52页 |
| 6.1 主要结论 | 第51页 |
| 6.2 值得进一步探索的问题 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
