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甘蔗eIF4E基因克隆与功能初探

摘要第7-9页
Abstract第9-10页
第一章 文献综述第11-23页
    1. 甘蔗花叶病病原第11-12页
    2. 甘蔗抗花叶病育种第12-13页
    3. Potyvirus病毒与寄主互作研究进展第13-19页
        3.1 Potyvirus病毒与寄主的互作第14-16页
        3.2 eIF4E与VPg互作启动病毒复制第16-17页
        3.4 隐性抗性基因及其在抗病育种上的应用第17-19页
    4. 酵母双杂交系统第19-20页
        4.1 酵母双杂交技术原理第19-20页
        4.2 酵母双杂交技术的应用第20页
    5. 双分子荧光互补技术第20-21页
        5.1 BiFC原理第20-21页
        5.2 BiFC在研究potyviruses与寄主互作中的应用第21页
    6. Real-time PCR技术及其应用第21-23页
第二章 材料与方法第23-41页
    1. 甘蔗eIF4E基因与SCMV- VPg基因克隆第23-32页
        1.1 实验材料与试剂第23页
        1.2 甘蔗eIF4E基因中间片段的克隆第23-26页
        1.3 利用RACE获得基因全长序列第26-31页
        1.4 基因全长序列的克隆第31页
        1.5 SCMV-VPg基因克隆第31-32页
    2. eIF4E基因与VPg基因互作验证第32-38页
        2.1 酵母双杂交系统验证SCMV-VPg与Sc-eIF4Es互作第32-34页
        2.2. 双分子荧光互补验证SCMV-VPg与Sc-eIF4Es互作第34-38页
    3. 定量PCR:感染病毒前后定量与组织特异性表达第38-41页
        3.1 材料与方法第38-39页
        3.2 试验方法第39-41页
第三章 结果与分析第41-58页
    1. 甘蔗eIF4E基因与甘蔗花叶病毒VPg基因克隆第41-42页
        1.1 甘蔗叶片RNA的提取第41页
        1.2 甘蔗eIF4E基因全长序列的克隆第41-42页
    2. 甘蔗eIF4E基因全长获得与生物信息学分析第42-51页
        2.1 甘蔗Sc-eIF4E蛋白二级结构预测第45-46页
        2.2 甘蔗Sc-eIF4E蛋白的等电点和分子量预测第46-47页
        2.3 甘蔗Sc-eIF4E蛋白的亚细胞定位预测第47页
        2.4 甘蔗Sc-eIF4E蛋白的三级结构预测第47-48页
        2.5 甘蔗Sc-eIF4E基因的系统进化分析第48-51页
    3. 蛋白互作验证结果第51-58页
        3.1 Sc-eIF4E、SCMV-VPg基因酵母表达载体的构建第51-52页
        3.2 SCMV-VPg与Sc-eIF4Es蛋白在酵母中的互作第52-53页
        3.3 双分子荧光互补技术验证SCMV-VPg与Sc-eIF4Es的互作第53-55页
        3.4 利用Real time PCR技术检测Sc-eIF4E基因mRNA的表达情况第55-58页
第四章 讨论第58-61页
    1. eIF4E基因与SCMV-VPg基因的克隆第58页
    2. Sc-eIF4E与SCMV-VPg的互作第58-59页
    3. 基因定量表达第59页
    4. 以Sc-eIF4E为分子改良靶点创制抗SMD甘蔗新种质的可行性第59-60页
    5. 主要结论及下一步研究计划第60-61页
        5.1 主要结论第60页
        5.2 下一步研究计划第60-61页
参考文献第61-65页
致谢第65页

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