| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-22页 |
| 1.1 进行性纤维发育不良性骨化症(fibrodysplasia ossificans progressiva,FOP)研究概况 | 第13-14页 |
| 1.1.1 FOP的临床特征 | 第13页 |
| 1.1.2 病因和发病机制 | 第13-14页 |
| 1.1.3 BMP信号通路 | 第14页 |
| 1.2 诱导多功能干细胞的发展历程 | 第14-16页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9基因编辑技术概述 | 第16-20页 |
| 1.3.1 高效和精确的基因组编辑技术：可编程的核酸酶 | 第17页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9的发展 | 第17-18页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9功能 | 第18页 |
| 1.3.4 CRISPR/Cas9基因编辑的应用 | 第18-20页 |
| 1.4 NgAgo概述 | 第20-21页 |
| 1.5 研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第2章 验证NgAgo能否对人类基因组进行基因编辑 | 第22-35页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验试剂和仪器 | 第22-24页 |
| 2.2.1 试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.2 仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 质粒 | 第24-25页 |
| 2.4 引物序列 | 第25页 |
| 2.5 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.5.1 ACVR1基因gDNA的设计 | 第25页 |
| 2.5.2 质粒扩大培养 | 第25页 |
| 2.5.3 质粒抽提 | 第25-26页 |
| 2.5.4 nls-NgAgo-GK酶切鉴定 | 第26页 |
| 2.5.5 细胞培养 | 第26-27页 |
| 2.5.6 细胞转染与药物筛选 | 第27-32页 |
| 2.6 结果分析 | 第32-34页 |
| 2.6.1 HUVEC电转染药物筛选后结果 | 第32页 |
| 2.6.2 T7EI酶切结果 | 第32-33页 |
| 2.6.3 PCR产物克隆到pJET1.2/blunt载体后进行DNA测序 | 第33-34页 |
| 2.7 讨论 | 第34-35页 |
| 第3章 ACVR1基因G328E靶位点修复模板设计及gRNA载体构建 | 第35-44页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 实验试剂和仪器 | 第35-36页 |
| 3.2.1 试剂 | 第35-36页 |
| 3.2.2 仪器 | 第36页 |
| 3.3 质粒 | 第36页 |
| 3.4 实验方法 | 第36-41页 |
| 3.4.1 CRISPR/Cas9gRNA靶位点与ssODNs修复模板设计 | 第36-38页 |
| 3.4.2 载体构建 | 第38-40页 |
| 3.4.3 连接产物转化 | 第40页 |
| 3.4.4 克隆接种与测序 | 第40-41页 |
| 3.5 实验结果 | 第41-42页 |
| 3.6 讨论 | 第42-44页 |
| 第4章 电转染法建立ACVR1基因G328E杂合点突变的FF-iPSCs细胞 | 第44-56页 |
| 4.1 引言 | 第44-45页 |
| 4.2 实验试剂和仪器 | 第45-46页 |
| 4.2.1 试剂 | 第45页 |
| 4.2.2 仪器 | 第45-46页 |
| 4.3 FF-iPSCs | 第46页 |
| 4.4 质粒 | 第46页 |
| 4.5 实验方法 | 第46-51页 |
| 4.5.1 FF-iPSCs细胞培养 | 第46-47页 |
| 4.5.2 细胞转染与药物筛选 | 第47-49页 |
| 4.5.3 嘌呤霉素筛选后FF-iPSCs细胞基因组的获得 | 第49页 |
| 4.5.4 ACVR1基因G328E周边DNA序列扩增及纯化 | 第49-50页 |
| 4.5.5 应用二代测序技术分析HDR介导的基因突变 | 第50-51页 |
| 4.6 结果分析 | 第51-54页 |
| 4.6.1 FF-iPSCs电转染药物筛选后结果 | 第51-52页 |
| 4.6.2 PCR产物纯化结果 | 第52-53页 |
| 4.6.3 二代测序结果分析 | 第53-54页 |
| 4.7 讨论 | 第54-56页 |
| 第5章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第69页 |
