| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩写表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-38页 |
| 1.1 传染性海绵状脑病/朊病毒疾病的概述 | 第17-19页 |
| 1.2 朊病毒疾病的治疗 | 第19-22页 |
| 1.2.1 靶向空间结构转换的朊蛋白 | 第19-20页 |
| 1.2.2 靶向细胞途径的朊病毒治疗 | 第20-21页 |
| 1.2.3 靶向未折叠蛋白反应 | 第21-22页 |
| 1.2.4 靶向溶酶体降解和自噬 | 第22页 |
| 1.2.5 其他朊病毒疾病治疗方向 | 第22页 |
| 1.3 抑制元件沉默性转录因子(Repressor element-1 silencing transcription factor,REST)/神经元限制性沉默因子(Neuron-restrictive silencer factor,NRSF) | 第22-30页 |
| 1.3.1 抑制元件沉默性转录因子(REST)概述 | 第22-26页 |
| 1.3.2 REST与神经系统疾病关系概述 | 第26-27页 |
| 1.3.3 REST与WNT (Wingless and INT-1)信号通路 | 第27-29页 |
| 1.3.4 REST应用于临床治疗前景展望 | 第29-30页 |
| 1.4 锂元素(Lithium)在神经系统疾病中的应用 | 第30-38页 |
| 1.4.1 锂元素临床研究进展概述 | 第30-31页 |
| 1.4.2 锂元素神经保护机制概述 | 第31-34页 |
| 1.4.3 锂元素与神经系统疾病 | 第34-38页 |
| 第二章 REST与PRP106-126刺激的原代神经元 | 第38-57页 |
| 引言 | 第38页 |
| 2.1 材料 | 第38-44页 |
| 2.1.1 细胞 | 第38-39页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 2.1.3 实验所用溶液的配制 | 第40-43页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第43-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-50页 |
| 2.2.1 SD大鼠脑组织原代皮质神经元的分离培养 | 第44-45页 |
| 2.2.2 PrP106-126毒性多肽的准备 | 第45页 |
| 2.2.3 FITC-PrP106-126毒性多肽的准备 | 第45页 |
| 2.2.4 原代神经元蛋白提取及检测 | 第45-46页 |
| 2.2.5 免疫印迹方法步骤 | 第46页 |
| 2.2.6 透射电镜样品准备及观察 | 第46-47页 |
| 2.2.7 免疫荧光方法步骤 | 第47页 |
| 2.2.8 细胞内活性氧(ROS)的检测 | 第47-48页 |
| 2.2.9 罗氏TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)细胞凋亡原位检测试剂盒检测细胞凋亡 | 第48-49页 |
| 2.2.10 Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 | 第49页 |
| 2.2.11 统计学分析 | 第49-50页 |
| 2.3 实验结果 | 第50-55页 |
| 2.3.1 PrP106-126对原代神经元造成的病理性损伤 | 第50-54页 |
| 2.3.2 PrP106-126改变原代神经元内REST的表达情况 | 第54页 |
| 2.3.3 PrP106-126诱导原代神经元内REST的核转移 | 第54-55页 |
| 2.4 小结与分析讨论 | 第55-57页 |
| 2.4.1 PrP106-126可以作为研究朊病毒疾病的良好体外实验模型 | 第55-56页 |
| 2.4.2 首次检测PrP106-126刺激原代神经元后内源REST表达量的改变和亚细胞定位 | 第56-57页 |
| 第三章 REST在朊病毒动物模型脑部的表达抑制 | 第57-69页 |
| 引言 | 第57页 |
| 3.1 材料 | 第57-60页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第57页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第57-58页 |
| 3.1.3 实验所用溶液的配制 | 第58-59页 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 | 第59-60页 |
| 3.2 实验方法 | 第60-63页 |
| 3.2.1 羊瘙痒因子263K毒株通过腹腔注射途径感染金黄地鼠 | 第60页 |
| 3.2.2 脑匀浆样品制备 | 第60页 |
| 3.2.3 免疫印迹方法检测脑匀浆样品中PrP~(Sc) | 第60-61页 |
| 3.2.4 脑组织石蜡切片的制作 | 第61页 |
| 3.2.5 脑组织石蜡切片HE染色 | 第61-62页 |
| 3.2.6 脑组织石蜡切片免疫组织化学染色 | 第62-63页 |
| 3.3 实验结果 | 第63-67页 |
| 3.3.1 朊病毒抑制金黄地鼠脑部REST蛋白表达 | 第63-64页 |
| 3.3.2 朊病毒显著抑制脑部大脑皮质和延髓区域REST蛋白表达 | 第64-66页 |
| 3.3.3 REST与LC3在朊病毒感染金黄地鼠大脑皮质区域共定位 | 第66-67页 |
| 3.4 小结与分析讨论 | 第67-69页 |
| 3.4.1 首次表明REST与朊病毒疾病模型的相关性 | 第67页 |
| 3.4.2 REST核质运输和核表达的普遍性和重要性 | 第67-69页 |
| 第四章 REST缓解PRP106-126诱导的原代神经元病理性损伤 | 第69-83页 |
| 引言 | 第69页 |
| 4.1 材料 | 第69-71页 |
| 4.1.1 细胞 | 第69页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第69-70页 |
| 4.1.3 实验所用溶液的配制 | 第70-71页 |
| 4.1.4 主要仪器和设备 | 第71页 |
| 4.2 实验方法 | 第71-74页 |
| 4.2.1 REST过表达载体信息 | 第71-72页 |
| 4.2.2 无内毒素重组质粒REST-HA的大量提取 | 第72-73页 |
| 4.2.3 无内毒素重组质粒的小量提取 | 第73页 |
| 4.2.4 REST-HA质粒转染至原代神经元 | 第73-74页 |
| 4.2.5 原代神经元REST基因的干扰 | 第74页 |
| 4.3 实验结果 | 第74-81页 |
| 4.3.1 REST过表达质粒和靶向REST小干扰siRNA的检测 | 第74-76页 |
| 4.3.2 过表达REST缓解PrP106-126对神经元突触和神经纤维的损伤 | 第76-78页 |
| 4.3.3 过表达REST缓解PrP106-126对原代神经元亚细胞结构的损伤;抑制REST加重损伤 | 第78页 |
| 4.3.4 过表达REST缓解PrP106-126对神经元活性的抑制和神经元死亡;抑制REST加剧损伤 | 第78-81页 |
| 4.4 小结与分析讨论 | 第81-83页 |
| 4.4.1 REST对神经元超微结构的保护,对抑制朊病毒疾病具有重要意义 | 第81-82页 |
| 4.4.2 首次报道REST过表达对PrP106-126造成神经元病理损伤的神经保护作用 | 第82-83页 |
| 第五章 REST在朊病毒体外实验模型中的神经保护机制 | 第83-102页 |
| 引言 | 第83页 |
| 5.1 材料 | 第83-86页 |
| 5.1.1 细胞和实验动物 | 第84页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第84-85页 |
| 5.1.3 实验所用溶液的配制 | 第85-86页 |
| 5.1.4 主要仪器和设备 | 第86页 |
| 5.2 实验方法 | 第86-88页 |
| 5.2.1 REST干扰质粒(the pGPH1/GFP/Neo-REST-Rat shRNA vector) | 第86页 |
| 5.2.2 shRNA-REST质粒转染至原代神经元 | 第86-87页 |
| 5.2.3 线粒体膜电位检测 | 第87页 |
| 5.2.4 线粒体形态检测 | 第87-88页 |
| 5.3 实验结果 | 第88-98页 |
| 5.3.1 过表达REST缓解PrP106-126对线粒体的损伤 | 第88-90页 |
| 5.3.2 过表达REST抑制PrP106-126升高的氧化应激和凋亡蛋白水平 | 第90-92页 |
| 5.3.3 过表达REST缓解PrP106-126对保护性蛋白的抑制 | 第92页 |
| 5.3.4 REST缓解PrP106-126对Akt-mTOR和经典Wnt/β-catenin信号通路抑制 | 第92-98页 |
| 5.4 小结与分析讨论 | 第98-102页 |
| 5.4.1 REST抑制朊病毒诱导的线粒体途径凋亡 | 第98-100页 |
| 5.4.2 REST缓解朊病毒诱导的自噬紊乱 | 第100-101页 |
| 5.4.3 REST为Akt-mTOR和经典Wnt信号通路的潜在纽带 | 第101-102页 |
| 第六章 经典LRP6-WNT信号通路对REST神经保护机制的调控 | 第102-112页 |
| 引言 | 第102页 |
| 6.1 材料 | 第102-103页 |
| 6.1.1 细胞 | 第102-103页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第103页 |
| 6.1.3 实验所用溶液的配制 | 第103页 |
| 6.1.4 主要仪器和设备 | 第103页 |
| 6.2 实验方法 | 第103-104页 |
| 6.2.1 LRP6的过表达和干扰 | 第103-104页 |
| 6.3 实验结果 | 第104-110页 |
| 6.3.1 经典LRP6-Wnt信号通路调节REST的表达 | 第104-107页 |
| 6.3.2 REST与经典Wnt信号标志性蛋白β-Catenin共定位 | 第107页 |
| 6.3.3 过表达/干扰LRP6影响REST的表达 | 第107-110页 |
| 6.3.4 LRP6保护神经突触蛋白,缓解PrP106-126诱导的神经纤维损伤 | 第110页 |
| 6.4 小结与分析讨论 | 第110-112页 |
| 6.4.1 首次揭示LRP6-Wnt信号通路对REST的特异性调控作用 | 第110页 |
| 6.4.2 LRP6-Wnt信号通路与REST协同的神经保护作用 | 第110-112页 |
| 第七章 锂元素对REST表达的调控机制 | 第112-118页 |
| 引言 | 第112页 |
| 7.1 材料 | 第112-113页 |
| 7.1.1 细胞 | 第112页 |
| 7.1.2 主要试剂 | 第112-113页 |
| 7.1.3 实验所用溶液的配制 | 第113页 |
| 7.1.4 主要仪器和设备 | 第113页 |
| 7.2 实验方法 | 第113页 |
| 7.3 实验结果 | 第113-117页 |
| 7.3.1 锂元素促进REST的核转移 | 第113-114页 |
| 7.3.2 锂元素特异性促进REST表达 | 第114-116页 |
| 7.3.3 锂元素恢复REST干扰引起的下游靶蛋白表达紊乱 | 第116-117页 |
| 7.4 小结与分析讨论 | 第117-118页 |
| 7.4.1 锂元素对Wnt信号通路的多重激活作用 | 第117页 |
| 7.4.2 锂元素促进REST表达及核转移的重要性 | 第117-118页 |
| 第八章 REST与锂元素神经保护作用的相关性 | 第118-131页 |
| 引言 | 第118页 |
| 8.1 材料 | 第118-119页 |
| 8.1.1 细胞 | 第118-119页 |
| 8.1.2 主要试剂 | 第119页 |
| 8.1.3 实验所用溶液的配制 | 第119页 |
| 8.1.4 主要仪器和设备 | 第119页 |
| 8.2 实验方法 | 第119-120页 |
| 8.2.1 免疫荧光观察神经纤维突触蛋白 | 第119-120页 |
| 8.2.2 REST补救实验步骤 | 第120页 |
| 8.3 实验结果 | 第120-128页 |
| 8.3.1 锂元素在朊病毒体外实验模型中的神经保护作用 | 第120-126页 |
| 8.3.2 REST在锂元素发挥神经保护作用中的重要地位 | 第126-128页 |
| 8.4 小结与分析讨论 | 第128-131页 |
| 8.4.1 LiCl对朊病毒体外模型的多途径神经保护作用 | 第128-130页 |
| 8.4.2 LiCl调控/协同REST共同发挥神经保护作用 | 第130-131页 |
| 结论 | 第131-132页 |
| 创新点 | 第132-133页 |
| 参考文献 | 第133-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 个人简介 | 第153-155页 |
