| 全文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-22页 |
| 单增李斯特菌LPXTG基序蛋白研究进展 | 第16页 |
| 1 单增李斯特菌一般特性 | 第16-18页 |
| 1.1 病原学特性 | 第16-17页 |
| 1.2 流行病学特性 | 第17页 |
| 1.3 发病机制 | 第17-18页 |
| 2 单增李斯特菌LPXTG基序蛋白 | 第18-22页 |
| 2.1 InlA | 第18页 |
| 2.2 InlF | 第18-19页 |
| 2.3 InlJ | 第19页 |
| 2.4 InlH | 第19页 |
| 2.5 InlI | 第19页 |
| 2.6 肌动蛋白聚集因子ActA(Lmo2085) | 第19-20页 |
| 2.7 Vip(Lmo0320) | 第20页 |
| 2.8 LapB(Lmo1666) | 第20页 |
| 2.9 其他LPXTG表面蛋白功能 | 第20-22页 |
| 第二章 试验研究 | 第22-71页 |
| 试验一 单增李斯特菌lmo0159、lmo0160基因克隆及序列分析 | 第22-37页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第22-23页 |
| 1.2 引物 | 第23页 |
| 1.3 主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.4 主要仪器 | 第24页 |
| 1.5 实验试剂配制方法 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-28页 |
| 2.1 LM90SB2菌株基因组的提取 | 第24-25页 |
| 2.2 PCR反应体系 | 第25页 |
| 2.3 目的基因片段胶回收 | 第25-26页 |
| 2.4 pMD19-T载体连接及转化 | 第26页 |
| 2.5 质粒的制备及测序 | 第26-27页 |
| 2.6 序列分析 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-36页 |
| 3.1 目的基因的扩增与克隆 | 第28页 |
| 3.2 lmo0159基因序列同源性比对及遗传进化树 | 第28-30页 |
| 3.3 lmo0160基因序列同源性比对及遗传进化树 | 第30-31页 |
| 3.4 Lmo0159蛋白的结构和功能预测 | 第31-34页 |
| 3.5 Lmo0160蛋白的结构和功能预测 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36页 |
| 5 小结 | 第36-37页 |
| 试验二 单增李斯特菌lmo0159、lmo0160基因缺失株的构建 | 第37-52页 |
| 1 材料 | 第37-40页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第37页 |
| 1.2 引物 | 第37-38页 |
| 1.3 主要试剂 | 第38-39页 |
| 1.4 主要仪器 | 第39页 |
| 1.5 实验试剂配制方法 | 第39-40页 |
| 2 方法 | 第40-45页 |
| 2.1 LM90SB2基因组的提取 | 第40页 |
| 2.2 上下游同源臂扩增及基因重叠PCR(SOE-PCR) | 第40-42页 |
| 2.3 基因缺失盒与pMD19-T连接 | 第42页 |
| 2.4 重组穿梭质粒pKSV7-(35)X的构建 | 第42页 |
| 2.5 LM90SB2感受态细胞的制备(青霉素G法) | 第42-43页 |
| 2.6 电转化 | 第43-44页 |
| 2.7 同源重组 | 第44页 |
| 2.8 基因缺失株遗传稳定性及生长曲线的鉴定 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-51页 |
| 3.1 lmo0159和lmo0160基因上下游同源臂扩增结果 | 第45页 |
| 3.2 基因重叠PCR扩增结果和测序鉴定结果 | 第45-46页 |
| 3.3 重组质粒pMD19-T-(35)X和pKSV7-(35)X酶切鉴定结果 | 第46-47页 |
| 3.4 电转后阳性转化子筛选与鉴定 | 第47-48页 |
| 3.5 同源重组的筛选与鉴定 | 第48-50页 |
| 3.6 基因缺失株遗传稳定行鉴定及生长曲线 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51页 |
| 5 小结 | 第51-52页 |
| 试验三 lmo0159、lmo0160基因缺失对单增李斯特菌环境适应性和生物被膜形成的影响 | 第52-62页 |
| 1 材料 | 第53页 |
| 1.1 菌株 | 第53页 |
| 1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 1.3 主要仪器 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-55页 |
| 2.1 生化特性鉴定 | 第53-54页 |
| 2.2 不同温度的生长曲线测定 | 第54页 |
| 2.3 不同pH的生长曲线测定 | 第54页 |
| 2.4 不同NaCl浓度条件下的生长曲线测定 | 第54-55页 |
| 2.5 不同EtOH浓度条件下的生长曲线测定 | 第55页 |
| 2.6 结晶紫染色法观察生物被膜形态 | 第55页 |
| 2.7 结晶紫染色法测定生物被膜形成能力 | 第55页 |
| 2.8 数据统计分析 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-60页 |
| 3.1 生化鉴定 | 第56页 |
| 3.2 不同温度的生长曲线测定 | 第56页 |
| 3.3 不同pH的生长曲线测定 | 第56-57页 |
| 3.4 不同NaCl浓度条件下的生长曲线测定 | 第57-58页 |
| 3.5 不同EtOH浓度条件下的生长曲线测定 | 第58-59页 |
| 3.6 生物被膜形态学观察 | 第59页 |
| 3.7 生物被膜形成能力测定 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 5 小结 | 第61-62页 |
| 试验四 lmo0159、lmo0160基因缺失对单增李斯特菌致病力的影响 | 第62-71页 |
| 1 材料 | 第62-64页 |
| 1.1 菌株、细胞株及试验动物 | 第62-63页 |
| 1.2 主要试剂 | 第63页 |
| 1.3 主要仪器 | 第63-64页 |
| 2 方法 | 第64-66页 |
| 2.1 细菌悬液的制备 | 第64页 |
| 2.2 细胞的培养 | 第64页 |
| 2.3 粘附试验 | 第64页 |
| 2.4 侵袭试验 | 第64-65页 |
| 2.5 细胞内增殖试验 | 第65页 |
| 2.6 小鼠存活率 | 第65页 |
| 2.7 LD50的测定 | 第65页 |
| 2.8 小鼠肝、脾、脑载菌量的测定 | 第65-66页 |
| 2.9 统计学分析 | 第66页 |
| 3 结果 | 第66-70页 |
| 3.1 细胞粘附试验结果 | 第66页 |
| 3.2 细胞侵袭试验结果 | 第66-67页 |
| 3.3 细胞内增殖试验结果 | 第67-68页 |
| 3.4 小鼠存活率 | 第68页 |
| 3.5 LD50测定结果 | 第68-69页 |
| 3.6 小鼠肝、脾、脑载菌量的测定结果 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70页 |
| 5 小结 | 第70-71页 |
| 第三章 结论 | 第71-72页 |
| 第四章 论文创新点 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81-82页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第82页 |
