| 内容提要 | 第4-5页 |
| 中文详细摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 第一篇 文献综述 A型流感病毒NS1蛋白研究进展 | 第15-27页 |
| 1.NS1蛋白结构及分区 | 第16-17页 |
| 2.NS1蛋白功能 | 第17-24页 |
| 2.1 抑制宿主mRNA的转录后加工及成熟mRNA的核输出过程. | 第17-19页 |
| 2.2 竞争结合宿主mRNA起始原件,促进病毒自身mRNA翻译. | 第19-20页 |
| 2.3 阻断PKR和OAS/RNaseL,直接抑制宿主的抗病毒状态 | 第20页 |
| 2.4 抑制宿主先天性免疫应答 | 第20-24页 |
| 2.5 NS1蛋白能激活PI3K,调节细胞凋亡 | 第24页 |
| 3.NS1蛋白的应用 | 第24-26页 |
| 3.1 区分疫苗免疫及野毒感染 | 第24-25页 |
| 3.2 作为外源基因的载体 | 第25页 |
| 3.3 展望 | 第25-26页 |
| 4.本研究目的意义 | 第26-27页 |
| 第二篇 研究内容 | 第27-73页 |
| 第一章 H9N2病毒NS1位点置换对NF-κB、IRF-3与IFN-β启动子转录活性影响 | 第27-42页 |
| 1.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 1.1.1 细胞、质粒、菌株 | 第28页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第28-29页 |
| 1.1.4 主要试剂配制 | 第29页 |
| 1.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 1.2.1 位点选择 | 第29-31页 |
| 1.2.2 引物设计 | 第31页 |
| 1.2.3 病毒RNA提取 | 第31-32页 |
| 1.2.4 NS基因扩增 | 第32页 |
| 1.2.5 NS与NS1基因位点置换 | 第32-33页 |
| 1.2.6 各位点置换NS1片段与T载体连接 | 第33页 |
| 1.2.7 NS1重组表达质粒构建 | 第33页 |
| 1.2.8 Western-blot | 第33-34页 |
| 1.2.9 双荧光素酶试验 | 第34页 |
| 1.2.10 差异统计分析 | 第34-35页 |
| 1.3 实验结果 | 第35-40页 |
| 1.3.1 NS1基因位点置换结果 | 第35-36页 |
| 1.3.2 各位点置换NS1片段与T载体连接结果 | 第36-37页 |
| 1.3.3 各位点置换NS1重组表达质粒构建结果 | 第37-38页 |
| 1.3.4 各位点置换NS1蛋白Western-blot结果 | 第38页 |
| 1.3.5 双荧光素酶试验结果 | 第38-40页 |
| 1.4 讨论 | 第40-41页 |
| 1.5 小结 | 第41-42页 |
| 第二章 H9N2病毒NS1位点置换对IFN-β与ISGs转录水平影响 | 第42-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第42-44页 |
| 2.1.1 细胞、病毒、质粒 | 第42页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第43页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第43-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-48页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第44-45页 |
| 2.2.2 病毒RNA提取 | 第45页 |
| 2.2.3 G1毒株全基因扩增 | 第45页 |
| 2.2.4 反向遗传系统质粒的构建 | 第45-46页 |
| 2.2.5 病毒拯救 | 第46页 |
| 2.2.6 拯救病毒TCID50测定 | 第46-47页 |
| 2.2.7 拯救病毒感染A549细胞 | 第47页 |
| 2.2.8 细胞RNA提取及反转录 | 第47页 |
| 2.2.9 荧光定量 | 第47-48页 |
| 2.2.10 差异统计分析 | 第48页 |
| 2.3 实验结果 | 第48-51页 |
| 2.3.1 G1毒株反向遗传8质粒构建结果 | 第48页 |
| 2.3.2 NS基因位点置换结果 | 第48-49页 |
| 2.3.3 病毒拯救结果 | 第49-50页 |
| 2.3.4 各拯救病毒TCID50测定结果 | 第50页 |
| 2.3.5 拯救病毒刺激后IFN-β及ISGsmRNA的转录水平 | 第50-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-54页 |
| 2.5 小结 | 第54-55页 |
| 第三章 NS1位点置换对H9N2病毒致病力影响研究 | 第55-73页 |
| 3.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 3.1.1 实验动物与病毒 | 第56页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第56页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第56-57页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第57页 |
| 3.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第57-58页 |
| 3.2.2 动物分组及攻毒 | 第58页 |
| 3.2.3 临床症状观察及病理剖检 | 第58页 |
| 3.2.4 器官病理打分 | 第58页 |
| 3.2.5 肺组织RNA提取 | 第58-59页 |
| 3.2.6 荧光定量 | 第59页 |
| 3.2.7 差异统计分析 | 第59页 |
| 3.3 实验结果 | 第59-65页 |
| 3.3.1 临床症状 | 第59页 |
| 3.3.2 病理剖检结果 | 第59-61页 |
| 3.3.3 攻毒鸡器官病理打分结果 | 第61-62页 |
| 3.3.4 攻毒鸡肺组织中IFN-α/β等炎性因子与ISGsmRNA的转录水平 | 第62-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-72页 |
| 3.5 小结 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 作者简介及在学期间所取得的研究成果 | 第84-85页 |
| 导师简介 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
