| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 结核病概述 | 第13页 |
| 1.2 分子病原学特征 | 第13-16页 |
| 1.2.1 ESAT-6蛋白特性 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Ag85b蛋白特性 | 第15-16页 |
| 1.3 鹿结核病的诊断 | 第16-20页 |
| 1.3.1 病理剖检 | 第16-17页 |
| 1.3.2 病原学检测方法 | 第17页 |
| 1.3.3 结核菌素皮内试验 | 第17页 |
| 1.3.4 血清学检测方法 | 第17-19页 |
| 1.3.5 分子生物学诊断 | 第19-20页 |
| 1.4 研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 牛分枝结核杆菌ESAT-6的表达与纯化 | 第21-34页 |
| 2.1 材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 牛结核分枝杆菌基因模板 | 第21页 |
| 2.1.2 载体和菌种 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器和试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 溶液及培养基的配制 | 第21-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 基因模版的制备 | 第24页 |
| 2.2.2 扩增PCR | 第24页 |
| 2.2.3 基因的克隆与鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.4 表达载体的构建 | 第25页 |
| 2.2.5 表达载体ESAT6-pNC-HisE转化宿主菌(枯草杆菌) | 第25-26页 |
| 2.2.6 ESAT-6表达与鉴定 | 第26页 |
| 2.2.7 目的蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.8 ESAT6的特异性检测 | 第27-28页 |
| 2.3 结果 | 第28-32页 |
| 2.3.1 ESAT-6基因扩增结果 | 第28页 |
| 2.3.2 中间载体ESAT6-pUC的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 重组质粒ESAT6-pNC-HisE的酶切鉴定结果 | 第29页 |
| 2.3.4 表达菌株的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.5 EMG1工程菌ESAT-6的表达与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.6 目标蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.7 ESAT-6特异性检测结果 | 第32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 牛结核分枝杆菌Ag85b的表达与纯化 | 第34-48页 |
| 3.1 材料 | 第34-37页 |
| 3.1.1 牛型结核分枝杆菌基因模板 | 第34页 |
| 3.1.2 载体和菌种 | 第34页 |
| 3.1.3 主要仪器和试剂 | 第34页 |
| 3.1.4 溶液及培养基的配制 | 第34-37页 |
| 3.2 方法 | 第37-41页 |
| 3.2.1 基因模版的制备 | 第37页 |
| 3.2.2 Ag85b基因扩增 | 第37页 |
| 3.2.3 Ag85b基因的克隆与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.4 Ag85b基因表达载体的构建 | 第38页 |
| 3.2.5 表达载体Ag85b-pNC-HisE转化宿主菌(枯草杆菌) | 第38-39页 |
| 3.2.6 蛋白的表达与鉴定 | 第39页 |
| 3.2.7 目的蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 3.2.8 Ag85b的特异性检测 | 第40-41页 |
| 3.3 结果 | 第41-47页 |
| 3.3.1 PCR结果 | 第41页 |
| 3.3.2 中间载体Ag85b-pUC的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.3 重组质粒Ag85b-pNC-HisE的酶切鉴定结果 | 第42-43页 |
| 3.3.4 表达菌株的鉴定 | 第43页 |
| 3.3.5 培养基优化结果 | 第43-45页 |
| 3.3.6 蛋白表达的WesternBlot分析结果 | 第45页 |
| 3.3.7 目标蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 3.3.8 Ag85b特异性检测 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 全文结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55页 |
