| 摘要 | 第2-3页 |
| abstract | 第3页 |
| 第一章 前言 | 第7-16页 |
| 1.1 手性胺类化合物的化学合成与生物合成方法 | 第7-10页 |
| 1.2 氨基酸脱氢酶(AADH)的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.3 课题的研究意义与方案设计 | 第14-16页 |
| 第二章 AADH-WT的表达、纯化、结晶与结构解析 | 第16-33页 |
| 2.1 AADH-WT的表达 | 第16-17页 |
| 2.2 AADH-WT的纯化 | 第17-19页 |
| 2.2.1 细胞破碎 | 第17页 |
| 2.2.2 Ni-NTA亲和层析纯化 | 第17-18页 |
| 2.2.3 凝胶排阻色谱分离 | 第18-19页 |
| 2.2.4 蛋白浓度测定 | 第19页 |
| 2.3 AADH-WT晶体初步筛选 | 第19-20页 |
| 2.4 AADH-WT的晶体优化 | 第20-21页 |
| 2.5 AADH-WT晶体的衍射数据收集与处理 | 第21-23页 |
| 2.5.1 蛋白晶体的冷冻保护剂选择 | 第21-22页 |
| 2.5.2 衍射数据的采集 | 第22-23页 |
| 2.6 AADH-WT结构解析 | 第23-31页 |
| 2.6.1 结构解析的方法简介 | 第23-25页 |
| 2.6.2 反常散射法解析相角信息 | 第25-28页 |
| 2.6.3 AADH-WT结构评价 | 第28-29页 |
| 2.6.4 AADH-WT的整体结构 | 第29-30页 |
| 2.6.5 AADH-WT突变位点的作用 | 第30-31页 |
| 2.7 本章小结 | 第31-33页 |
| 第三章 E310G/A314Y的表达、纯化、结晶与结构解析 | 第33-45页 |
| 3.1 E310G/A314Y的表达 | 第33页 |
| 3.2 E310G/A314Y的纯化 | 第33-35页 |
| 3.2.1 细胞破碎 | 第33页 |
| 3.2.2 Ni-NTA亲和层析纯化 | 第33-34页 |
| 3.2.3 凝胶排阻色谱分离 | 第34页 |
| 3.2.4 蛋白浓度测定 | 第34-35页 |
| 3.3 E310G/A314Y晶体初步筛选 | 第35页 |
| 3.4 E310G/A314Y晶体优化 | 第35页 |
| 3.5 E310G/A314Y晶体的衍射数据收集与处理 | 第35-36页 |
| 3.5.1 蛋白晶体的冷冻保护剂的选择 | 第35页 |
| 3.5.2 衍射数据的采集 | 第35-36页 |
| 3.6 E310G/A314Y结构解析 | 第36-39页 |
| 3.6.2 AADHE310G/A314Y的整体结构 | 第37-38页 |
| 3.6.3 突变位点附近的相互作用 | 第38-39页 |
| 3.7 E310G/A314Y-NADP+复合物数据收集与解析 | 第39-44页 |
| 3.7.1 E310G/A314Y-NADP+复合物晶体筛选与优化 | 第39-40页 |
| 3.7.2 E310G/A314Y-NADP+结晶数据收集 | 第40-41页 |
| 3.7.3 E310G/A314Y-NADP+复合物结构解析 | 第41-43页 |
| 3.7.4 E310G/A314Y-NADP+结构评价 | 第43页 |
| 3.7.5 E310G/A314Y-NADP+复合物结构 | 第43-44页 |
| 3.8 本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 催化与突变机理研究 | 第45-53页 |
| 4.1 野生型AADH与突变体结构对比 | 第45-46页 |
| 4.2 E310G/A314Y与复合物结构对比 | 第46-47页 |
| 4.3 AADH-WT与NADP+的模拟结合 | 第47-48页 |
| 4.4 AADH-WT的分子对接 | 第48-49页 |
| 4.5 E310G/A314Y的分子对接 | 第49-50页 |
| 4.6 各对接底物与活性中心的距离 | 第50-51页 |
| 4.7 反应的机理 | 第51-52页 |
| 4.8 本章小结 | 第52-53页 |
| 第五章 总结与展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 附录A 实验材料与方法 | 第57-63页 |
| A.1实验仪器 | 第57-58页 |
| A.2实验材料 | 第58-61页 |
| A.3实验方法 | 第61-63页 |
| A.3.1 普通感受态细胞的制备与转化 | 第61-62页 |
| A.3.2 超级感受态细胞DH5α的制备和转化 | 第62页 |
| A.3.3 蛋白质的小量表达测试 | 第62-63页 |
| 附录B Abbreviation缩略语表 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
