| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-54页 |
| 1.1 基因突变概述 | 第13-27页 |
| 1.1.1 DNA突变研究进展 | 第13-27页 |
| 1.2 mRNA概述 | 第27-37页 |
| 1.2.1 mRNA的加工 | 第28页 |
| 1.2.2 mRNA的检测 | 第28-37页 |
| 1.3 DNA甲基化概述 | 第37-45页 |
| 1.3.1 用于发现未知的表观遗传变化的检测技术 | 第38-40页 |
| 1.3.2 用于分析特定调节区或基因内的DNA甲基化 | 第40-45页 |
| 1.4 恒温指数扩增技术概述 | 第45-50页 |
| 1.4.1 EXPAR的特点 | 第46-47页 |
| 1.4.2 EXPAR的应用 | 第47-50页 |
| 1.5 本论文的研究内容及创新点 | 第50-54页 |
| 第2章 基于GlaI-EXPAR的高灵敏度DNA甲基化分析 | 第54-74页 |
| 2.1 前言 | 第54-56页 |
| 2.2 实验部分 | 第56-59页 |
| 2.2.1 试剂与仪器 | 第56-57页 |
| 2.2.2 从癌细胞HCT116中提取基因组DNA | 第57-58页 |
| 2.2.3 非甲基化DNA模板和甲基化DNA模板的制备 | 第58-59页 |
| 2.2.4 标准的GlaI-EXPAR反应体系 | 第59页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第59-72页 |
| 2.3.1 基于GlaI-EXPAR的方法检测甲基化DNA的原理 | 第59-61页 |
| 2.3.2 基于GlaI-EXPAR检测位点特异性甲基化DNA的可行性分析 | 第61-63页 |
| 2.3.3 GlaI核酸内切酶的量对检测DNA甲基化的影响 | 第63-64页 |
| 2.3.4 Nt.BstNBI切刻内切酶量的优化 | 第64页 |
| 2.3.5 Vent (exo-) DNA聚合酶量的优化 | 第64-65页 |
| 2.3.6 EXPAR反应温度的优化 | 第65-66页 |
| 2.3.7 GlaI-EXPAR测定法检测目标M的性能的分析 | 第66-69页 |
| 2.3.8 检测癌细胞中基因组DNA提取物中的甲基化DNA | 第69-70页 |
| 2.3.9 GlaI-EXPAR测定法用于甲基化分析的通用性评估 | 第70-72页 |
| 2.4 本章小结 | 第72-74页 |
| 第3章 基于竞争杂交核酸探针的RNase H-EXPAR方法检测单碱基突变mRNA | 第74-90页 |
| 3.1 引言 | 第74-76页 |
| 3.2 实验部分 | 第76-78页 |
| 3.2.1 实验试剂和材料 | 第76-77页 |
| 3.2.2 从癌细胞中提取总RNA | 第77页 |
| 3.2.3 标准的基于单碱基错配热力学差异的RNase H-EXPAR检测mRNA单碱基突变的反应体系 | 第77-78页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第78-88页 |
| 3.3.1 基于单碱基错配的热力学差异的RNase H-EXPAR检测mRNA突变的原理 | 第78-80页 |
| 3.3.2 基于单碱基错配热力学差异的RNase H-EXPAR方法检测单碱基突变mRNA的可行性的分析 | 第80页 |
| 3.3.3 酶切温度对检测mRNA突变的影响 | 第80-82页 |
| 3.3.4 Vent (exo-) DNA聚合酶量的优化 | 第82-83页 |
| 3.3.5 Nt.BstNBI切刻内切酶量的优化 | 第83-84页 |
| 3.3.6 EXPAR反应温度的优化 | 第84-85页 |
| 3.3.7 基于单碱基错配的热力学差异的RNase H-EXPAR检测突变mRNA的性能分析 | 第85-86页 |
| 3.3.8 基于单碱基错配的热力学差异的RNase H-EXPAR检测突变mRNA的特异性分析 | 第86页 |
| 3.3.9 基于竞争性杂交探针的RNase H-EXPAR检测突变mRNA的原理 | 第86-88页 |
| 3.3.10 基于竞争性杂交探针的RNase H-EXPAR检测突变mRNA的特异性分析 | 第88页 |
| 3.4 本章小结 | 第88-90页 |
| 结论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 科研成果 | 第118页 |
