| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-36页 |
| 1.1 植物病原菌简介 | 第11-16页 |
| 1.1.1 植物病原菌的分类 | 第11-15页 |
| 1.1.1.1 罗尔斯通氏菌属(Ralstonia) | 第12页 |
| 1.1.1.2 土壤杆菌属(Agrobacterium) | 第12-13页 |
| 1.1.1.3 欧文氏菌属(Erwinia) | 第13页 |
| 1.1.1.4 假单胞菌属(Pseudomonas) | 第13-14页 |
| 1.1.1.5 黄单胞菌属(Xanthomonas) | 第14页 |
| 1.1.1.6 木质部小菌属(Xylella) | 第14-15页 |
| 1.1.2 十字花科黑腐病菌表型特征及相关分类 | 第15页 |
| 1.1.3 十字花科黑腐病菌8004遗传学研究概况 | 第15-16页 |
| 1.2 植物与病原菌分子机理研究 | 第16-21页 |
| 1.2.1 植物病原菌致病相关因子 | 第16-19页 |
| 1.2.1.1 胞外多糖(extracellular polysaccharides,EPS) | 第17页 |
| 1.2.1.2 脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS) | 第17页 |
| 1.2.1.3 胞外酶(Extracellular enzymes) | 第17-18页 |
| 1.2.1.4 植物毒素(phytotoxin) | 第18页 |
| 1.2.1.5 Ⅲ型效应物(T3SS effectors,T3SEs) | 第18-19页 |
| 1.2.2 植物病原菌致病相关基因 | 第19-21页 |
| 1.2.2.1 hrp基因 | 第19-20页 |
| 1.2.2.2 avr/R基因 | 第20-21页 |
| 1.2.2.3 dsp基因 | 第21页 |
| 1.3 植物病原菌分泌机制 | 第21-23页 |
| 1.3.1 Ⅰ 型分泌系统(Type Ⅰ Sectetion System,T1SS) | 第22页 |
| 1.3.2 Ⅱ 型分泌系统(Type Ⅱ Sectetion System,T2SS) | 第22页 |
| 1.3.3 Ⅲ 型分泌系统(Type Ⅲ Sectetion System,T3SS) | 第22页 |
| 1.3.4 Ⅳ 型分泌系统(Type Ⅳ Sectetion System,T4SS) | 第22-23页 |
| 1.3.5 Ⅴ 型分泌系统(Type Ⅴ Sectetion System,T5SS) | 第23页 |
| 1.3.6 Ⅵ 型分泌系统(Type Ⅵ Sectetion System,T6SS) | 第23页 |
| 1.4 Ⅲ型分泌系统及其分子机制 | 第23-26页 |
| 1.4.1 T3SS的组成 | 第24-25页 |
| 1.4.2 T3SS的分泌机制 | 第25页 |
| 1.4.3 T3SS与致病性的关系 | 第25-26页 |
| 1.5 hrp基因概况 | 第26-35页 |
| 1.5.1 hrp的组成及功能 | 第26-27页 |
| 1.5.2 hrp调控机理 | 第27-28页 |
| 1.5.3 hrp基因的相关研究进展 | 第28-30页 |
| 1.5.4 hrp研究概况 | 第30-35页 |
| 1.5.4.1 Xcc 8004 hrp基因的组成 | 第30-31页 |
| 1.5.4.2 Xcc 8004 hrp基因功能研究进展 | 第31-35页 |
| 1.6 本研究的内容和意义 | 第35-36页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第35页 |
| 1.6.2 研究意义 | 第35-36页 |
| 第二章 材料与方法 | 第36-60页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-45页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第36-42页 |
| 2.1.2 培养基与培养条件 | 第42-43页 |
| 2.1.2.1 大肠杆菌(E.coli) | 第42页 |
| 2.1.2.2 黄单胞菌 | 第42-43页 |
| 2.1.3 菌种保藏 | 第43页 |
| 2.1.4 抗生素及其他试剂 | 第43-45页 |
| 2.1.5 其他实验材料 | 第45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-60页 |
| 2.2.1 细菌核酸的制备 | 第45-48页 |
| 2.2.1.1 质粒的提取(碱裂解法) | 第45-46页 |
| 2.2.1.2 总DNA的提取 | 第46页 |
| 2.2.1.3 细菌总RNA的提取 | 第46-47页 |
| 2.2.1.3.1 总RNA的提取 | 第46-47页 |
| 2.2.1.3.2 总RNA中的DNA消化反应 | 第47页 |
| 2.2.1.4 cDNA的合成 | 第47-48页 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第48页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第48页 |
| 2.2.4 PCR扩增DNA片段 | 第48-49页 |
| 2.2.4.1 PCR反应 | 第48-49页 |
| 2.2.4.2 RT-PCR | 第49页 |
| 2.2.5 DNA操作 | 第49-50页 |
| 2.2.5.1 DNA酶切 | 第49-50页 |
| 2.2.5.2 DNA连接 | 第50页 |
| 2.2.5.3 DNA纯化与回收 | 第50页 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备与转化 | 第50-52页 |
| 2.2.6.1 电击法转化大肠杆菌 | 第50-51页 |
| 2.2.6.2 Cacl_2法转化大肠杆菌 | 第51-52页 |
| 2.2.7 DNA测序 | 第52页 |
| 2.2.8 三亲本接合 | 第52-53页 |
| 2.2.9 植株实验 | 第53-55页 |
| 2.2.9.1 致病性检测 | 第53-54页 |
| 2.2.9.2 定性HR | 第54页 |
| 2.2.9.3 定量HR | 第54-55页 |
| 2.2.10 细菌在寄主中的生长繁殖 | 第55-56页 |
| 2.2.11 缺失突变体的构建 | 第56-57页 |
| 2.2.11.1 缺失突变体所用载体及原理 | 第56-57页 |
| 2.2.11.1.1 所用载体 | 第56-57页 |
| 2.2.11.1.2 原理 | 第57页 |
| 2.2.12 构建缺失突变体技术路线 | 第57-58页 |
| 2.2.13 构建互补菌株技术路线 | 第58-60页 |
| 第三章 结果与分析 | 第60-87页 |
| 3.1 Xcc 8004各hrp基因缺失突变体的构建 | 第60-70页 |
| 3.1.1 DM3005缺失突变体的构建 | 第60-70页 |
| 3.2 突变体的反式功能互补 | 第70-79页 |
| 3.2.1 c3005互补菌株的构建 | 第70页 |
| 3.2.2 其余hrp基因互补菌株的构建 | 第70-79页 |
| 3.3 植株实验结果 | 第79-82页 |
| 3.3.1 各hrp基因突变体及互补菌株在寄主萝卜上的致病性结果 | 第79-80页 |
| 3.3.2 各hrp基因突变体及互补菌株在寄主甘蓝上的致病性结果 | 第80-81页 |
| 3.3.3 各hrp基因突变体及互补菌株HR结果 | 第81-82页 |
| 3.4 Xcc 8004各hrp基因的转录与调控 | 第82-83页 |
| 3.5 XC3014基因对不同效应物转运的影响 | 第83-85页 |
| 3.5.1 XC2081和XC3014双缺失突变体的构建 | 第83-84页 |
| 3.5.2 已鉴定的9个效应物基因导入DM20813014的HR反应检测 | 第84-85页 |
| 3.6 质粒丢失实验结果 | 第85-87页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第87-91页 |
| 4.1 总结 | 第87页 |
| 4.2 关于hrp基因的功能研究 | 第87-88页 |
| 4.3 关于互补问题 | 第88页 |
| 4.4 关于hrp基因表达调控 | 第88-89页 |
| 4.5 关于hpaP基因 | 第89页 |
| 4.6 关于XC3024基因 | 第89-90页 |
| 4.7 展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-105页 |
| 附录 | 第105-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第111页 |
