| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 狂犬病概述 | 第15页 |
| 1.2 狂犬病病毒的概述 | 第15-18页 |
| 1.2.1 狂犬病病毒的病原学 | 第15-16页 |
| 1.2.2 基因分型 | 第16-17页 |
| 1.2.3 基因组结构 | 第17页 |
| 1.2.4 病毒蛋白及其功能 | 第17-18页 |
| 1.3 狂犬病病毒的发病机理 | 第18-20页 |
| 1.4 狂犬病病毒受体 | 第20-26页 |
| 1.4.1 尼古丁乙酰胆碱受体 | 第21-22页 |
| 1.4.2 神经细胞粘附分子 | 第22-23页 |
| 1.4.3 低亲和力神经营养因子受体P75 | 第23-25页 |
| 1.4.4 受体的其他成员 | 第25-26页 |
| 1.5 本课题研究的目的与意义 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-32页 |
| 2.1.1 病毒、细胞、载体和菌种 | 第27页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第27页 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2.1.4 实验主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第29-32页 |
| 2.2 技术路线 | 第32-35页 |
| 2.2.1 本研究所用引物 | 第32-35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-52页 |
| 2.3.1 NCAM、P75及nAchR基因的克隆 | 第35-38页 |
| 2.3.2 原核表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 2.3.3 真核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.3.4 NCAM、nAchR和P75的多克隆抗体的制备 | 第41-45页 |
| 2.3.5 Western Blot鉴定纯化复性透析后的重组蛋白 | 第45-46页 |
| 2.3.6 免疫小鼠 | 第46页 |
| 2.3.7 多克隆抗体特异性的检测 | 第46-48页 |
| 2.3.8 流式细胞术检测接毒后受体的变化情况 | 第48-49页 |
| 2.3.9 实时荧光定量PCR检测接毒后受体mRNA的变化情况 | 第49-52页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第52-101页 |
| 3.1 狂犬病病毒受体NCAM的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第52-66页 |
| 3.1.1 NCAM表达区域的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列 | 第52-53页 |
| 3.1.2 NCAM全基因的克隆 | 第53-54页 |
| 3.1.3 NCAM-711基因的原核表达载体的构建 | 第54-56页 |
| 3.1.4 NCAM-1818基因真核表达载体的构建 | 第56-58页 |
| 3.1.5 NCAM重组蛋白的诱导表达 | 第58-59页 |
| 3.1.6 NCAM重组蛋白表达形式的鉴定以及纯化 | 第59-61页 |
| 3.1.7 Western Blot验证抗NCAM多克隆抗体与重组NCAM蛋白的反应性 | 第61-62页 |
| 3.1.8 间接免疫荧光验证细胞中天然表达的NCAM以及过表达的NCAM与抗NCAM多克隆抗体的反应性 | 第62-63页 |
| 3.1.9 Western Blot验证抗NCAM多抗与BHK-21细胞中过表达的NCAM蛋白的反应性 | 第63-66页 |
| 3.2 狂犬病病毒受体nAchR的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第66-76页 |
| 3.2.1 nAchR表达区域的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列 | 第66-67页 |
| 3.2.2 nAchR全基因的克隆 | 第67-68页 |
| 3.2.3 nAchR-525基因的原核表达载体的构建 | 第68-70页 |
| 3.2.4 nAchR-1509基因真核表达载体的构建 | 第70-71页 |
| 3.2.5 nAchR重组蛋白的诱导表达 | 第71-72页 |
| 3.2.6 nAchR重组蛋白表达形式的鉴定以及蛋白纯化 | 第72-74页 |
| 3.2.7 Western Blot验证抗nAchR多克隆抗体与重组nAchR蛋白的反应性 | 第74页 |
| 3.2.8 间接免疫荧光验证细胞中天然表达的nAchR以及过表达的nAchR与抗nAchR多克隆抗体的反应性 | 第74-76页 |
| 3.3 P75的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第76-89页 |
| 3.3.1 P75表达区域的核苷酸序列及其编码的氨基酸 | 第76-77页 |
| 3.3.2 P75全基因的克隆 | 第77-78页 |
| 3.3.3 P75基因的原核表达载体的构建 | 第78-80页 |
| 3.3.4 P75基因真核表达载体的构建 | 第80-82页 |
| 3.3.5 P75重组蛋白的诱导表达 | 第82页 |
| 3.3.6 P75重组蛋白表达形式的鉴定以及纯化 | 第82-84页 |
| 3.3.7 Western Blot验证抗NCAM多克隆抗体与重组P75蛋白的反应性 | 第84-85页 |
| 3.3.8 间接免疫荧光验证细胞中天然表达的P75以及过表达的P75与抗P75多克隆抗体的反应性 | 第85-87页 |
| 3.3.9 Western Blot验证抗P75多抗与BHK-21细胞中过表达的P75蛋白的反应性 | 第87-89页 |
| 3.4 用制备得到的多抗检测RV感染细胞后NCAM、nAchR及P75受体表达量的变化 | 第89-95页 |
| 3.5 实时荧光定量PCR证实NA、BHK-21以及RAW264.7细胞感染RV后各受体mRNA变化情况是否与蛋白表达变化情况一致 | 第95-101页 |
| 3.5.1 NCAM、P75和nAchR标准曲线的建立 | 第95-97页 |
| 3.5.2 实时荧光定量PCR验证接毒后受体的表达情况 | 第97-101页 |
| 第四章 讨论 | 第101-108页 |
| 4.1 构建NCAM、nAchR、P75原核表达的策略 | 第101-103页 |
| 4.2 重组蛋白的纯化 | 第103-105页 |
| 4.2.1 包涵体的制备以及纯化 | 第104页 |
| 4.2.2 可溶性蛋白的纯化 | 第104-105页 |
| 4.3 多克隆抗体反应性与特异性的鉴定 | 第105-106页 |
| 4.4 狂犬病病毒弱毒株RC-HL感染NA、BHK-21、RAW264.7细胞后NCAM、nAchR及P75的表达 | 第106-108页 |
| 第五章 结论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第118页 |
