| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| ·植酸酶研究进展 | 第12-17页 |
| ·植酸与植酸酶 | 第12页 |
| ·植酸酶的种类和来源 | 第12-13页 |
| ·植酸酶的酶学性质 | 第13页 |
| ·植酸酶基因结构 | 第13-14页 |
| ·植酸酶的作用机理 | 第14-15页 |
| ·植酸酶基因工程研究进展 | 第15-17页 |
| ·二硫键对蛋白质的影响 | 第17-20页 |
| ·二硫键与酶分子构象的关系 | 第17页 |
| ·二硫键对蛋白质折叠的影响 | 第17-18页 |
| ·二硫键对酶蛋白催化活性的影响 | 第18-19页 |
| ·植酸酶中的二硫键 | 第19-20页 |
| ·引入新的分子内二硫键提高酶蛋白稳定性的尝试 | 第20-21页 |
| ·合理设计二硫键引入位点的相关软件 | 第21页 |
| ·本研究的工作基础、研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-41页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·菌株、质粒、酶 | 第23页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23-24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·主要试剂的配制 | 第25-29页 |
| ·实验相关溶液的配制 | 第25-28页 |
| ·培养基的配制 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-41页 |
| ·二硫键突变位点的选择 | 第29页 |
| ·二硫键突变体质粒的获得 | 第29-33页 |
| ·各突变体质粒电击转化毕赤酵母 | 第33-36页 |
| ·酵母转化子的筛选与鉴定 | 第36-37页 |
| ·各突变体基因在毕赤酵母中的诱导表达及表达产物的分离纯化 | 第37-39页 |
| ·酶学性质研究 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-58页 |
| ·二硫键突变位点的选择 | 第41-47页 |
| ·植酸酶的三维结构 | 第41-42页 |
| ·新引入的二硫键的位点的选择 | 第42-47页 |
| ·突变体质粒的获得 | 第47-49页 |
| ·MP19/34、MP32/346、MP111/253 和MP193/318 质粒的获得 | 第47-48页 |
| ·MP32/246/111/253 和MP32/246/193/318 质粒的获得 | 第48-49页 |
| ·电击转化毕赤酵母 | 第49-51页 |
| ·突变体植酸酶在毕赤酵母中的诱导表达 | 第51-52页 |
| ·新引入二硫键的检测 | 第52-53页 |
| ·新引入的二硫键对植酸酶酶促反应动力学性质的影响 | 第53-58页 |
| ·基本动力学参数 | 第53-54页 |
| ·酶反应最适pH | 第54-56页 |
| ·酶的最适反应温度 | 第56-57页 |
| ·新引入的二硫键对植酸酶热稳定性的影响 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-62页 |
| ·植酸酶热稳定性的研究 | 第58页 |
| ·设计引入新的二硫键 | 第58-59页 |
| ·新引入的二硫键对酶蛋白结构和功能的影响 | 第59-60页 |
| ·不同二硫键的作用不同 | 第60-61页 |
| ·影响蛋白质结构与功能的其他因素 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第78页 |
