| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语 | 第8-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-15页 |
| 1 热休克蛋白的发现 | 第12页 |
| 2 热休克蛋白的分类及小热休克蛋白家族的特点 | 第12页 |
| 2.1 热休克蛋白的分类 | 第12页 |
| 2.2 小热休克蛋白家族的共性 | 第12页 |
| 3 热休克蛋白的功能研究 | 第12-13页 |
| 3.1 分子伴侣功能 | 第12-13页 |
| 3.2 稳定细胞骨架和维持细胞正常功能 | 第13页 |
| 3.3 维护细胞膜的稳定性 | 第13页 |
| 3.4 提高机体对各种胁迫的耐受性 | 第13页 |
| 3.5 细胞生长发育调控和增强抗氧化作用 | 第13页 |
| 4 小热休克蛋白在细胞中分布的研究 | 第13-14页 |
| 5 家蚕小热休克蛋白研究进展 | 第14页 |
| 6 展望 | 第14-15页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第15-17页 |
| 1 实验目的及意义 | 第15页 |
| 2 实验内容 | 第15-16页 |
| 3 实验流程图 | 第16-17页 |
| 第三章 BmHSP20.8蛋白在家蚕细胞中的亚细胞定位分析 | 第17-33页 |
| 1 材料与试剂及仪器设备 | 第17页 |
| 1.1 材料 | 第17页 |
| 1.2 试剂 | 第17页 |
| 1.3 仪器设备 | 第17页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第17页 |
| 2 BmHSP20.8 蛋白亚细胞定位预测 | 第17页 |
| 3 真核表达载体pIEx-1-BmHSP20.8/EGFP-BmHSP20.8/BmHSP20.8-EGFP的构建 | 第17-23页 |
| 3.1 家蚕脂肪体总RNA的提取和cDNA的合成 | 第17-18页 |
| 3.2 重组载体pIEx-1-BmHSP20.8的构建 | 第18-20页 |
| 3.3 重组表达载体pIEX-1-EGFP-BmHSP20.8/BmHSP20.8-EGFP的构建 | 第20-23页 |
| 4 BmHSP20.8 蛋白在家蚕细胞中的表达与定位分析 | 第23-25页 |
| 4.1 BmHSP20.8真核表达载体的转染 | 第23-24页 |
| 4.2 BmHSP20.8和EGFP在家蚕BmN细胞中的表达 | 第24页 |
| 4.3 BmHSP20.8蛋白在家蚕BmN细胞线粒体定位的鉴定 | 第24-25页 |
| 5 结果 | 第25-32页 |
| 5.1 BmHSP20.8蛋白亚细胞定位预测 | 第25-26页 |
| 5.2 BmHSP2-8基因的PCR扩增 | 第26页 |
| 5.3 重组质粒pIEx-1-BmHSP20.8的鉴定 | 第26-27页 |
| 5.4 BmHSP20.8基因分别在EGFP的C端和N端时的PCR扩增 | 第27页 |
| 5.5 重组载体pIEX-1-EGFP-BmHSP20.8/BmHSP2-8-EGFP的鉴定 | 第27-28页 |
| 5.6 BmHSP20.8蛋白在家蚕BmN细胞中的表达 | 第28-30页 |
| 5.7 BmHSP20.8蛋白在BmN细胞中的线粒体定位鉴定 | 第30-32页 |
| 6 讨论 | 第32-33页 |
| 第四章 BmHSP20.8蛋白线粒体定位信号区域的鉴定 | 第33-44页 |
| 1 材料与试剂 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-37页 |
| 2.1 截短型BmHSP20.8序列的确定 | 第33页 |
| 2.2 EGFP融合的BmHSP20.8截短型真核表达载体的构建 | 第33-36页 |
| 2.3 质粒转染 | 第36页 |
| 2.4 荧光检测EGFP的表达情况 | 第36页 |
| 2.5 Western blot鉴定蛋白在细胞中的分布情况 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-43页 |
| 3.1 截短BmHSP20.8基因的PCR扩增 | 第37页 |
| 3.2 重组EGFP融合截短BmHSP20.8表达载体的鉴定 | 第37-39页 |
| 3.3 荧光显微镜观测EGFP融合截短型BmHSP20.8蛋白的表达情况 | 第39-41页 |
| 3.4 BmHSP20.8蛋白的线粒体定位信号区域的鉴定 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 BmHSP20.8蛋白体外分子伴侣活性研究 | 第44-54页 |
| 1 材料与试剂 | 第44-45页 |
| 1.1 材料 | 第44页 |
| 1.2 试剂 | 第44页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-49页 |
| 2.1 重组载体pETduet-HIS-SUMO-BmHSP20.8的构建 | 第45-47页 |
| 2.2 重组载体pETduet-HIS-SUMOBmHSP20.8转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞 | 第47页 |
| 2.3 BmHSP20.8蛋白在大肠杆菌中的原核表达 | 第47页 |
| 2.4 蛋白的定量(Bradford法) | 第47-48页 |
| 2.5 蛋白凝胶电泳检测 | 第48页 |
| 2.6 重组蛋白BmHSP20.8的纯化 | 第48页 |
| 2.7 胰蛋白酶(trypsin)敏感性实验 | 第48页 |
| 2.8 柠檬酸合酶(CS)的热聚集实验 | 第48-49页 |
| 3 实验结果 | 第49-54页 |
| 3.1 BmHSP20.8基因的PCR扩增 | 第49页 |
| 3.2 重组质粒pETduet-HIS-SUMO-BmHSP20.8的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3 BmHSP20.8在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第50页 |
| 3.4 重组BmHSP20.8蛋白对胰蛋白酶(trypsin)的敏感性检测 | 第50-51页 |
| 3.5 重组BmHSP20.8蛋白对柠檬酸合酶热聚集的抑制作用 | 第51-54页 |
| 第六章 BmHSP20.8相互作用蛋白的免疫共沉淀分离 | 第54-59页 |
| 1 材料与试剂及设备仪器 | 第54页 |
| 1.1 材料与仪器 | 第54-55页 |
| 1.2 试剂 | 第54页 |
| 1.3 试剂的配制 | 第54-55页 |
| 2 方法 | 第55-56页 |
| 2.1 家蚕细胞表达的HIS融合BmHSP20.8蛋白的免疫共沉淀 | 第55页 |
| 2.2 免疫共沉淀产物中BmHSP20.8蛋白的Western blot检测 | 第55页 |
| 2.3 BmHSP20.8相互作用蛋白的鉴定 | 第55-56页 |
| 3 结果 | 第56-58页 |
| 3.1 免疫共沉淀分离BmHSP20.8蛋白的Western blot鉴定 | 第56页 |
| 3.2 BmHSP20.8相互作用蛋白的鉴定分析 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
