| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.1 背景概况 | 第11页 |
| 1.2 多胺及托品烷类生物碱的概况 | 第11-12页 |
| 1.2.1 多胺的概况 | 第11-12页 |
| 1.2.2 托品烷类生物碱的概况 | 第12页 |
| 1.3 多胺及托品烷类生物合成途径 | 第12-15页 |
| 1.3.1 多胺及托品烷类生物碱生物合成途径网 | 第12-14页 |
| 1.3.2 腐氨生物合成途径上的酶和基因 | 第14-15页 |
| 1.3.3 ODC途径和ADC途径在植物腐氨合成的贡献 | 第15页 |
| 1.4 物理和化学诱导 | 第15-17页 |
| 第二章 绪论 | 第17-19页 |
| 2.1 研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2.2 研究范围和内容 | 第18页 |
| 2.3 技术路线 | 第18-19页 |
| 第三章 材料方法 | 第19-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第19页 |
| 3.2 菌株和质粒 | 第19页 |
| 3.3 仪器和设备 | 第19页 |
| 3.4 试剂盒及试剂 | 第19-20页 |
| 3.5 自配试剂 | 第20页 |
| 3.6 常规方法介绍 | 第20-23页 |
| 3.6.1 RNA的提取 | 第20-21页 |
| 3.6.2 DNA产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第21页 |
| 3.6.3 目的条带的回收 | 第21-22页 |
| 3.6.4 目的片段与克隆载体T连接 | 第22页 |
| 3.6.5 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第22页 |
| 3.6.6 连接反应物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第22-23页 |
| 3.7 AbODC基因cDNA的克隆与分析 | 第23-31页 |
| 3.7.1 从颠茄总RNA合成第一链cDNA | 第23页 |
| 3.7.2 目的基因的克隆 | 第23-28页 |
| 3.7.3 AbODC基因的生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 3.7.4 颠茄AbODC基因组DNA及启动子序列的克隆 | 第29-31页 |
| 3.8 AbODC1基因的原核表达及功能验证 | 第31-35页 |
| 3.8.1 AbODC1基因原核表达载体的构建 | 第31-34页 |
| 3.8.2 AbODC1重组蛋白的诱导表达 | 第34-35页 |
| 3.8.3 AbODC1重组蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| 3.9 颠茄发根培养体系的建立 | 第35-39页 |
| 3.9.1 根癌农杆菌C58C1(pRiA4)的活化 | 第35-36页 |
| 3.9.2 根癌农杆菌C58C1(pRiA4)菌株转化颠茄外植体 | 第36页 |
| 3.9.3 颠茄发根的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| 3.9.4 基因表达量的检查 | 第37-39页 |
| 3.9.5 颠茄发根中多胺含量的检测 | 第39页 |
| 3.10 颠茄植物高校表达工程菌及RNAi沉默工程菌的获得 | 第39-47页 |
| 3.10.1 颠茄植物高校表达工程菌的获得 | 第39-42页 |
| 3.10.2 颠茄植物RNAi沉默工程菌的获得 | 第42-47页 |
| 第四章 结果与分析 | 第47-75页 |
| 4.1 AbODC1和AbODC2基因的获得 | 第47-49页 |
| 4.1.1 AbODC1基因的获得 | 第47-48页 |
| 4.1.2 AbODC2基因的获得 | 第48-49页 |
| 4.2 AbODC基因的生物信息学分析 | 第49-56页 |
| 4.2.1 AbODC基因的序列分析 | 第49-51页 |
| 4.2.2 AbODC氨基酸序列的多重比对 | 第51-53页 |
| 4.2.3 AbODC分子进化树的构建 | 第53页 |
| 4.2.4 AbODC蛋白的保守结构域分析 | 第53-54页 |
| 4.2.5 AbODC信号肽和转运肽预测 | 第54页 |
| 4.2.6 AbODC蛋白二级结构预测 | 第54-55页 |
| 4.2.7 AbODC蛋白三级结构预测 | 第55-56页 |
| 4.3 AbODC基因DNA和启动子的获得和分析 | 第56-62页 |
| 4.3.1 AbODC1和AbODC2基因组DNA的获得 | 第56-59页 |
| 4.3.2 AbODC1和AbODC2基因启动子分析 | 第59-62页 |
| 4.4 AbODC基因的原核表达及功能验证 | 第62-65页 |
| 4.4.1 AbODC1重组蛋白的诱导表达和纯化 | 第63-64页 |
| 4.4.2 AbODC1重组蛋白活性检测 | 第64-65页 |
| 4.5 AbODC基因的组织表达谱分析 | 第65-66页 |
| 4.5.1 AbODC基因荧光定量引物特异性分析 | 第65-66页 |
| 4.5.2 AbODC基因的组织表达谱分析 | 第66页 |
| 4.6 颠茄发根对不同诱导子的响应 | 第66-71页 |
| 4.6.1 颠茄发根的获得 | 第66-67页 |
| 4.6.2 颠茄发根的诱导子处理 | 第67-71页 |
| 4.7 AbODC1和AbODC2超量标达及RNAi载体构建 | 第71-75页 |
| 4.7.1 工程菌C58C1-P1305-AbODC1和C58C1-P1305-AbODC2的获得 | 第71-73页 |
| 4.7.2 工程菌C58C1-PBIN19-AbOBC1和C58C1-PBIN19-AbODC2的获得 | 第73-75页 |
| 第五章 结论与展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 缩略词表 | 第83-85页 |
| 硕士期间发表论文 | 第85页 |
| 参加课题 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
