| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 PAT1对mTORC1信号调控的研究进展 | 第13-22页 |
| 1.1 mTORC1信号通路 | 第13-17页 |
| 1.1.1 mTORC1的结构与功能 | 第13-14页 |
| 1.1.2 溶酶体是mTORC1激活的主要细胞器 | 第14-15页 |
| 1.1.3 mTORC1信号的活性受到氨基酸的调节 | 第15-17页 |
| 1.2 PAT1研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2.1 PATs蛋白家族 | 第17-18页 |
| 1.2.2 PAT1的生理功能 | 第18-20页 |
| 1.2.3 PAT1的转运底物 | 第20页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 CRTSPR/Cas9系统的概况 | 第22-25页 |
| 2.1 基因编辑技术 | 第22-23页 |
| 2.2 CRSIPR/Cas9系统的结构与应用 | 第23-25页 |
| 第三章 氨基酸信号对PAT1调控mTORC1活性的影响 | 第25-36页 |
| 3.1 材料 | 第25-26页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第25-26页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第26页 |
| 3.2 方法 | 第26-31页 |
| 3.2.1 myc-PAT1真核表达载体的构建 | 第26-28页 |
| 3.2.2 构建稳定表达myc-PAT1-pCDNA3.1的细胞株 | 第28-31页 |
| 3.2.3 氨基酸信号对PAT1调控mTORC1活性的影响 | 第31页 |
| 3.3 试验结果 | 第31-34页 |
| 3.3.1 myc-PAT1重组质粒的酶切鉴定结果 | 第31-32页 |
| 3.3.2 myc-PAT1重组质粒的测序结果 | 第32页 |
| 3.3.3 Westernblot鉴定稳定表达myc-PAT1细胞株的结果 | 第32页 |
| 3.3.4 免疫荧光检测myc-PAT1细胞内定位 | 第32-33页 |
| 3.3.5 Westernblot检测过表达myc-PAT1对mTORC1活性的影响 | 第33页 |
| 3.3.6 检测氨基酸信号对myc-PAT1调控mTORC1活性的影响 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-35页 |
| 3.5 小结 | 第35-36页 |
| 第四章 氨基酸转运功能对PAT1调控mTORC1活性的影响 | 第36-45页 |
| 4.1 材料 | 第36页 |
| 4.2 方法 | 第36-39页 |
| 4.2.1 构建结合氨基酸突变的myc-PAT1载体 | 第36-38页 |
| 4.2.2 构建结合质子突变的myc-PAT1载体 | 第38页 |
| 4.2.3 免疫荧光检测PAT1突变体的细胞内定位 | 第38页 |
| 4.2.4 构建稳定表达PAT1突变体蛋白的细胞系 | 第38页 |
| 4.2.5 Westernbloting鉴定稳转细胞系 | 第38页 |
| 4.2.6 过表达结合氨基酸突变的PAT1对mTORC1活性的影响 | 第38页 |
| 4.2.7 过表达结合质子突变的PAT1对于mTORC1活性的影响 | 第38-39页 |
| 4.2.8 PAT1氨基酸运输拮抗剂对mTORC1活性的影响 | 第39页 |
| 4.3 试验结果 | 第39-43页 |
| 4.3.1 PAT1重组载体鉴定结果 | 第39-40页 |
| 4.3.2 免疫荧光染色结果 | 第40页 |
| 4.3.3 稳定表达PAT1突变体蛋白的细胞系鉴定结果 | 第40-41页 |
| 4.3.4 过表达结合氨基酸突变的PAT1对mTORC1活性的影响 | 第41页 |
| 4.3.5 过表达结合质子突变的PAT1对mTORC1活性的影响 | 第41-42页 |
| 4.3.6 PAT1氨基酸运输拮抗剂对mTORC1活性的影响 | 第42-43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-44页 |
| 4.5 小结 | 第44-45页 |
| 第五章 PAT1功能缺失对mTORC1活性的影响 | 第45-54页 |
| 5.1 材料 | 第45页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第45页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第45页 |
| 5.2 方法 | 第45-49页 |
| 5.2.1 构建PAT1基因敲除载体 | 第45-47页 |
| 5.2.2 构建PAT1敲除的HEK293细胞系 | 第47-48页 |
| 5.2.3 westernblot检测敲除PAT1对mTORC1的影响 | 第48-49页 |
| 5.3 结果 | 第49-53页 |
| 5.3.1 PAT1敲除的单克隆细胞系的PCR鉴定结果 | 第49-50页 |
| 5.3.2 PAT1敲除的单克隆细胞系的测序结果 | 第50-51页 |
| 5.3.3 敲除PAT1对调控mTORC1活性的影响 | 第51-53页 |
| 5.4 讨论 | 第53页 |
| 5.5 小结 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61-63页 |
| 附录1：试剂的配制 | 第61-62页 |
| 附录2：稳定表达myc-PAT1蛋白的单克隆细胞系鉴定结果 | 第62-63页 |
| 缩略词 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
