| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 鱼藤素抗肿瘤作用研究现状 | 第13-14页 |
| 1.2 乳腺癌的发病机理和研究现状 | 第14-15页 |
| 1.3 模式生物斑马鱼 | 第15-18页 |
| 1.3.1 斑马鱼的优势和特点 | 第15-16页 |
| 1.3.2 斑马鱼在肿瘤研究中的应用 | 第16-18页 |
| 1.4 FGFR 信号通路 | 第18-21页 |
| 1.4.1 FGF 及其受体的结构和生物学特性 | 第18-20页 |
| 1.4.2 FGFR 与肿瘤的关系 | 第20-21页 |
| 1.5 主要研究内容和研究意义 | 第21-23页 |
| 第二章 鱼藤素抑制乳腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡 | 第23-31页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第23页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.3 细胞株 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.3.1 细胞复苏与计数 | 第24页 |
| 2.3.2 MTT 实验 | 第24-25页 |
| 2.3.3 克隆形成实验 | 第25页 |
| 2.3.4 Hoechst 33258 实验 | 第25页 |
| 2.3.5 In Situ Cell Death Detection 实验 | 第25-26页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第26-30页 |
| 2.4.1 鱼藤素抑制乳腺癌细胞的增殖，对正常乳腺细胞没有明显影响 | 第26-27页 |
| 2.4.2 鱼藤素抑制乳腺癌细胞的克隆形成，对正常乳腺细胞没有明显影响 | 第27-28页 |
| 2.4.3 鱼藤素诱导乳腺癌细胞的凋亡，对正常乳腺细胞没有明显影响 | 第28-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-31页 |
| 第三章 鱼藤素抑制斑马鱼胚胎细胞增殖并诱导细胞凋亡 | 第31-38页 |
| 3.1 前言 | 第31页 |
| 3.2 材料与方法 | 第31-32页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第31-32页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第32页 |
| 3.3 实验方法 | 第32-35页 |
| 3.3.1 显微镜下观察斑马鱼的胚胎发育 | 第32页 |
| 3.3.2 免疫组化实验 | 第32-34页 |
| 3.3.3 In Situ Cell Death Detection 实验 | 第34-35页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第35-37页 |
| 3.4.1 鱼藤素处理斑马鱼胚胎可使其发育延缓或停滞 | 第35页 |
| 3.4.2 鱼藤素处理斑马鱼胚胎可抑制斑马鱼细胞增殖 | 第35-36页 |
| 3.4.3 鱼藤素处理斑马鱼胚胎可诱导斑马鱼细胞凋亡 | 第36-37页 |
| 3.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第四章 鱼藤素降低乳腺癌细胞和斑马鱼胚胎中 FGFR4 的水平，同时影响 PI3K/AKT通路和 MAPK 通路 | 第38-52页 |
| 4.1 前言 | 第38页 |
| 4.2 材料与方法 | 第38-40页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第38-40页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第40页 |
| 4.3 实验方法 | 第40-46页 |
| 4.3.1 基因芯片检测 | 第40页 |
| 4.3.2 胚胎收集及总 RNA 的提取 | 第40-41页 |
| 4.3.3 反转录 | 第41-42页 |
| 4.3.4 QPCR 引物设计与合成 | 第42页 |
| 4.3.5 实时荧光定量 PCR | 第42-43页 |
| 4.3.6 Western Blot 分析 | 第43-46页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第46-50页 |
| 4.4.1 基因芯片检测结果 | 第46-47页 |
| 4.4.2 QPCR 分析发现乳腺癌细胞和斑马鱼中的 FGFR4 基因在鱼藤素作用下下调明显 | 第47-49页 |
| 4.4.3 Western Blot 分析发现乳腺癌细胞和斑马鱼中的 FGFR4 基因及相关基因蛋白在鱼藤素作用下下调明显 | 第49-50页 |
| 4.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第五章 RESCUE 实验证实鱼藤素诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖的作用 | 第52-66页 |
| 5.1 前言 | 第52页 |
| 5.2 材料与方法 | 第52-53页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第52页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第52-53页 |
| 5.3 实验方法 | 第53-59页 |
| 5.3.1 引物设计合成 | 第53页 |
| 5.3.2 PCR 扩增斑马鱼 FGFR4 | 第53-54页 |
| 5.3.3 PCR 产物切胶回收及纯化 | 第54-55页 |
| 5.3.4 酶切 | 第55-56页 |
| 5.3.5 连接 | 第56-57页 |
| 5.3.6 菌落 PCR 鉴定 | 第57页 |
| 5.3.7 pEGFP-C3-ZFGFR4 和 pEGFP-C3-HFGFR4 质粒提取 | 第57-58页 |
| 5.3.8 细胞转染 | 第58页 |
| 5.3.9 MTT 实验 | 第58页 |
| 5.3.10 Hoechst 33258 细胞凋亡分析 | 第58页 |
| 5.3.11 TUNEL 细胞凋亡染色分析 | 第58页 |
| 5.3.12 显微注射 | 第58-59页 |
| 5.3.13 免疫组化实验 | 第59页 |
| 5.3.14 TUNEL 法斑马鱼细胞凋亡分析 | 第59页 |
| 5.3.15 免疫蛋白印迹分析 | 第59页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第59-64页 |
| 5.4.1 FGFR4 过表达可以 rescue 鱼藤素对乳腺癌细胞 MCF-7 的生长抑制作用 | 第59-60页 |
| 5.4.2 TUNEL 法分析 FGFR4 过表达可以 recue 鱼藤素诱导乳腺癌细胞 MCF-7 凋亡的作用 | 第60-61页 |
| 5.4.3 Hoechst 33258 染色法分析 FGFR4 过表达是否可以 recue 鱼藤素诱导乳腺癌细胞 MCF-7 凋亡的作用 | 第61页 |
| 5.4.4 FGFR4 过表达可以 recue 鱼藤素抑制斑马鱼细胞增殖的作用 | 第61-62页 |
| 5.4.5 FGFR4 过表达可以 recue 鱼藤素诱导斑马鱼细胞凋亡的作用 | 第62-63页 |
| 5.4.6 Western Blot 法检测人和斑马鱼 FGFR4 过表达后相关通路蛋白的变化 | 第63-64页 |
| 5.5 本章小结 | 第64-66页 |
| 总结与展望 | 第66-67页 |
| 1 总结 | 第66页 |
| 2 创新点 | 第66页 |
| 3 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附件 | 第77页 |
