| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 前言 | 第15-40页 |
| 1.1 分子伴侣概述 | 第15-30页 |
| 1.1.1 hsp60的性质与功能概述 | 第16-21页 |
| 1.1.1.1 组Ⅱ chaperonins的整体结构 | 第16-17页 |
| 1.1.1.2 组Ⅱ chaperonins的变构效应 | 第17-18页 |
| 1.1.1.3 组Ⅱ chaperonins的构象变化以及折叠循环 | 第18-19页 |
| 1.1.1.4 组Ⅱ chaperonins的底物识别机制 | 第19-20页 |
| 1.1.1.5 组Ⅱ chaperonins的折叠机制 | 第20-21页 |
| 1.1.2 prefoldin的性质与功能概述 | 第21-26页 |
| 1.1.2.1 prefoldin的结构 | 第21-23页 |
| 1.1.2.2 prefoldin与底物蛋白的结合机制 | 第23-24页 |
| 1.1.2.3 prefoldin与组chaperonins之间的相互作用 | 第24-25页 |
| 1.1.2.4 prefoldin的折叠活性 | 第25页 |
| 1.1.2.5 prefoldin与hsp60之间的协同作用 | 第25-26页 |
| 1.1.3 小热休克蛋白的功能与作用机制 | 第26-30页 |
| 1.1.3.1 shsps的结构 | 第26-28页 |
| 1.1.3.1.1 shsp的α-晶体结构域的结构与性质 | 第26页 |
| 1.1.3.1.2 shsp的N-端结构域 | 第26-27页 |
| 1.1.3.1.3 shsp的C-端结构域 | 第27-28页 |
| 1.1.3.2 shsps的作用机制 | 第28-29页 |
| 1.1.3.3 shsp与其它分子伴侣的协同作用 | 第29-30页 |
| 1.2 α-淀粉酶概述 | 第30-32页 |
| 1.2.1 α-淀粉酶的结构 | 第30页 |
| 1.2.2 淀粉的酶转化过程 | 第30-31页 |
| 1.2.3 BLA的特性 | 第31页 |
| 1.2.4 PFA的特性 | 第31-32页 |
| 1.3 氨基糖苷类抗生素 | 第32-34页 |
| 1.3.1 翻译高保真度的意义 | 第32-33页 |
| 1.3.2 氨基糖苷类抗生素引起蛋白质错误翻译的作用机制 | 第33页 |
| 1.3.3 氨基糖苷类抗生素的摄入机制以及引起细胞死亡的机制 | 第33-34页 |
| 1.4 P450概述 | 第34-38页 |
| 1.4.1 细胞色素P450 BM3 | 第35页 |
| 1.4.2 细胞色素P450BM3亚家族(CYP102A) | 第35-36页 |
| 1.4.3 P450BM3的晶体结构 | 第36-37页 |
| 1.4.4 P450 BM3的改造及应用 | 第37-38页 |
| 1.5 本课题的研究意义 | 第38-40页 |
| 第2章 材料与方法 | 第40-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第40-43页 |
| 2.1.1 菌种 | 第40页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第40页 |
| 2.1.3 常用试剂 | 第40-42页 |
| 2.1.4 质粒 | 第42-43页 |
| 2.1.5 引物 | 第43页 |
| 2.2 主要溶液 | 第43-46页 |
| 2.3 培养基 | 第46页 |
| 2.3.1 LB液体培养基 | 第46页 |
| 2.3.2 LB琼脂培养基 | 第46页 |
| 2.3.3 NZY+液体培养基 | 第46页 |
| 2.4 实验方法 | 第46-50页 |
| 第3章 极端嗜热古菌分子伴侣蛋白帮助PFA进行可溶性表达的影响 | 第50-70页 |
| 3.1 前言 | 第50-51页 |
| 3.2 实验材料 | 第51页 |
| 3.2.1 试剂 | 第51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 3.3.1 菌种培养 | 第51页 |
| 3.3.2 细胞破碎 | 第51页 |
| 3.3.3 耐高温淀粉酶活力测定方法(DNS法) | 第51-52页 |
| 3.3.3.1 葡萄糖标准曲线的测定 | 第51-52页 |
| 3.3.3.2 样品酶活力测定方法 | 第52页 |
| 3.3.4 Folin-酚法测蛋白含量 | 第52-54页 |
| 3.3.4.1 蛋白标准曲线的测定 | 第52-53页 |
| 3.3.4.2 样品蛋白含量的测定 | 第53-54页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE电泳 | 第54页 |
| 3.3.6 渗透物处理实验 | 第54页 |
| 3.3.7 热激处理实验 | 第54页 |
| 3.3.8 新型耐热淀粉酶(PFTA)酶活性的测定 | 第54页 |
| 3.4 实验结果 | 第54-68页 |
| 3.4.1 异源PFA在大肠杆菌中的表达 | 第54-55页 |
| 3.4.2 来源于极端嗜热古菌P.furiosus分子伴侣对PFA可溶性表达的影响 | 第55-57页 |
| 3.4.3 提高分子伴侣蛋白的表达量对PFA可溶性表达的影响 | 第57-59页 |
| 3.4.4 分子伴侣与PFA共表达对PFA可溶性表达的影响 | 第59-60页 |
| 3.4.5 prefolditi表达量高于PFA的表达量时对PFA可溶性表达水平的影口向 | 第60-62页 |
| 3.4.6 渗透物处理对PFA可溶性表达的影响 | 第62-64页 |
| 3.4.7 热激处理对PFA可溶性表达的影响 | 第64-65页 |
| 3.4.8 极端嗜热古菌中的分子伴侣与大肠杆菌中的分子伴侣对于PFA可溶性表达促进作用的比较 | 第65-67页 |
| 3.4.9 P.furiosus分子伴侣系统对相同来源的PFTA淀粉酶可溶性表达的影响 | 第67-68页 |
| 3.5 本章小结 | 第68-70页 |
| 第4章 极端嗜热古菌分子伴侣帮助大肠杆菌抵御抗生素以及氧化环境的作用 | 第70-87页 |
| 4.1 前言 | 第70-71页 |
| 4.2 实验方法 | 第71-72页 |
| 4.2.1 菌种培养 | 第71页 |
| 4.2.2 生长曲线的测定 | 第71页 |
| 4.2.3 菌存活实验 | 第71页 |
| 4.2.4 经链霉素处理后各菌种细胞内的沉淀分离实验 | 第71-72页 |
| 4.2.5 SDS-PAGE电泳 | 第72页 |
| 4.2.6 最低抑制浓度实验 | 第72页 |
| 4.2.7 细胞内ROS含量测定实验 | 第72页 |
| 4.2.8 细胞膜电势的测定 | 第72页 |
| 4.2.9 抗氧化性实验 | 第72页 |
| 4.3 实验结果 | 第72-85页 |
| 4.3.1 帮助E.coli抵御链霉素处理的分子伴侣的筛选 | 第73页 |
| 4.3.2 来源于极端嗜热古菌P.furiosus的分子伴侣与来源于大肠杆菌的分子伴侣系统抵御链霉素能力的比较 | 第73-76页 |
| 4.3.3 低浓度链霉素处理后各菌种帮助大肠杆菌抵御氨基糖苷类抗生素的作用 | 第76-78页 |
| 4.3.4 各分子伴侣帮助大肠杆菌抵御高浓度链霉素的情况 | 第78-81页 |
| 4.3.5 过量表达分子伴侣菌种对链霉素的最低抑菌浓度 | 第81页 |
| 4.3.6 各菌种细胞内ROS含量 | 第81-82页 |
| 4.3.7 各菌种细胞膜电势的测定 | 第82-84页 |
| 4.3.8 分子伴侣帮助大肠杆菌抵御氧化性环境 | 第84-85页 |
| 4.4 本章小结 | 第85-87页 |
| 第5章 极端嗜热古菌分子伴侣蛋白对靛蓝生物转化量的影响 | 第87-100页 |
| 5.1 前言 | 第87-88页 |
| 5.2 实验方法 | 第88-90页 |
| 5.2.1 Bacillus megaterium基因组DNA的抽提 | 第88页 |
| 5.2.2 P450BM3基因的克隆以及定点突变 | 第88-89页 |
| 5.2.3 菌种培养 | 第89页 |
| 5.2.4 细胞破碎 | 第89页 |
| 5.2.5 靛蓝含量的测定 | 第89页 |
| 5.2.6 CO-差光谱定量实验 | 第89-90页 |
| 5.2.7 体外酶活测定实验 | 第90页 |
| 5.2.8 NADPH/NADP~+测定实验 | 第90页 |
| 5.2.9 SDS-PAGE电泳 | 第90页 |
| 5.3 实验结果 | 第90-98页 |
| 5.3.1 P450BM3突变体的诱导表达 | 第90-91页 |
| 5.3.2 极端嗜热古菌分子伴侣蛋白对P450 BM3突变体合成靛蓝产量的影响 | 第91-92页 |
| 5.3.3 分子伴侣表达量的提高对P450 BM3突变体合成靛蓝产量的影响 | 第92-93页 |
| 5.3.4 两种来源的分子伴侣对P450 BM3突变体合成靛蓝产量的影响 | 第93-94页 |
| 5.3.5 不同底物浓度对靛蓝生物转化量的影响 | 第94-95页 |
| 5.3.6 CO定量以及体外酶活实验 | 第95-97页 |
| 5.3.7 NADPH/NADP+比率对靛蓝产量的影响 | 第97-98页 |
| 5.3.8 各菌种中细胞色素P450酶的表达情况 | 第98页 |
| 5.4 本章小结 | 第98-100页 |
| 第6章 结论与展望 | 第100-103页 |
| 6.1 主要结论 | 第100-101页 |
| 6.2 展望 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-128页 |
| 攻读博士学位期间研究成果 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 卷内备考表 | 第130页 |
