| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 一、文献综述 | 第9-19页 |
| 1.1 、丹参综述 | 第9页 |
| 1.2 、丹参药用活性成分 | 第9-15页 |
| 1.2.1 、丹参酮概述 | 第10-11页 |
| 1.2.2 、丹参酮合成途径 | 第11-14页 |
| 1.2.3 、丹酚酸概述 | 第14页 |
| 1.2.4 、丹酚酸合成途径 | 第14-15页 |
| 1.3 、乙烯利对丹参次级代谢产物合成的影响 | 第15-16页 |
| 1.4 、丹参发根技术 | 第16页 |
| 1.5 、乙烯信号通路 | 第16页 |
| 1.6 、植物转录因子调控策略 | 第16-17页 |
| 1.7 、EIN3转录因子 | 第17页 |
| 1.8 、课题研究意义 | 第17-19页 |
| 二、材料与方法 | 第19-45页 |
| 2.1 、实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 、植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 、质粒和菌株 | 第19页 |
| 2.1.3 、仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.1.4 、试剂及药品 | 第20-21页 |
| 2.1.5 、常用溶液及试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.6 、乙烯利诱导子的配制 | 第23页 |
| 2.2 、实验方法 | 第23-45页 |
| 2.2.1 、丹参无菌苗的快速扩繁 | 第23页 |
| 2.2.2 、生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.2.3 、组织表达谱分析 | 第23-24页 |
| 2.2.4 、诱导表达谱分析 | 第24页 |
| 2.2.5 、乙烯利处理后的次级代谢产物的含量分析 | 第24页 |
| 2.2.6 、丹参EIN3基因的克隆 | 第24-26页 |
| 2.2.7 、亚细胞定位载体的构建 | 第26-29页 |
| 2.2.8 、植物表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.9 、发根农杆菌C58C1介导的丹参外植体发根 | 第30-31页 |
| 2.2.10 、根癌农杆菌EHA105介导的丹参外植体再生植株 | 第31-32页 |
| 2.2.11 、转基因毛状根阳性鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.12 、转基因阳性毛状根qRT-PCR分析 | 第33-35页 |
| 2.2.13 、丹参转基因毛状根的丹参酮和丹酚酸含量的测定 | 第35-37页 |
| 2.2.14 、SmEIN3目的基因遗传转化模式植物拟南芥 | 第37-38页 |
| 2.2.15 、酵母单杂交 | 第38-41页 |
| 2.2.16 、Dual-luciferase | 第41-42页 |
| 2.2.16.1 、实验原理 | 第41-42页 |
| 2.2.17 、原核诱导蛋白表达 | 第42-43页 |
| 2.2.18 、酵母双杂 | 第43-45页 |
| 三、结果与讨论 | 第45-72页 |
| 3.1 、目的基因SmEIN3的克隆 | 第45-46页 |
| 3.2 、SmEIN3基因的生物信息学分析 | 第46-50页 |
| 3.2.1 、SmEIN3基因的系统进化树分析 | 第46页 |
| 3.2.2 、SmEIN3三级结构预测 | 第46-47页 |
| 3.2.3 、SmEIN3蛋白的亚细胞定位预测 | 第47页 |
| 3.2.4 、SmEIN3蛋白与同源蛋白多重序列比对 | 第47-48页 |
| 3.2.5 、启动子元件分析 | 第48-50页 |
| 3.3 、SmEIN3基因的表达模式分析 | 第50-53页 |
| 3.3.1 、丹参各组织RNA提取 | 第50页 |
| 3.3.2 、SmEIN3基因的组织表达谱 | 第50-51页 |
| 3.3.3 、SmEIN3基因的诱导表达谱 | 第51-52页 |
| 3.3.4 、SmEIN3蛋白的亚细胞定位 | 第52-53页 |
| 3.4 、SmEIN3转基因毛状根的功能鉴定 | 第53-62页 |
| 3.4.1 、过表达载体和亚细胞定位载体pHB-SmEIN3-YFP的构建 | 第53-54页 |
| 3.4.2 、质粒转化C58C1、GV3101、EHA105农杆菌 | 第54-55页 |
| 3.4.3 、目的基因SmEIN3的农杆菌遗传转化丹参外植体 | 第55-56页 |
| 3.4.4 、转基因毛状根的阳性鉴定 | 第56-58页 |
| 3.4.5 、转基因毛状根的qRT-PCR分析 | 第58-62页 |
| 3.5 、转基因毛状根中提取和测定丹参酮的含量 | 第62-63页 |
| 3.5.1 、转基因毛状根中CT、DT、TI、TIIA、TT的含量 | 第62-63页 |
| 3.6 、转基因毛状根中提取和测定丹酚酸的含量 | 第63-64页 |
| 3.6.1 、转基因毛状根中CA、RA、SAB、SAA、TSA的含量 | 第63-64页 |
| 3.7 、SmEIN3转录因子的调控关系 | 第64-69页 |
| 3.7.1 、酵母单杂原理 | 第64页 |
| 3.7.2 、酵母单杂载体的构建 | 第64-65页 |
| 3.7.3 、酵母单杂结果 | 第65页 |
| 3.7.4 、Dual-luciferase | 第65-68页 |
| 3.7.5 、原核表达 | 第68-69页 |
| 3.8 、SmEIN3蛋白与其他蛋白的互作关系 | 第69-71页 |
| 3.8.1 、酵母双杂交原理 | 第69页 |
| 3.8.2 、酵母双杂交载体构建 | 第69-70页 |
| 3.8.3 、酵母双杂交结果 | 第70页 |
| 3.8.4 、信号调控网络模式图 | 第70-71页 |
| 3.9 、目的基因SmEIN3遗传转化模式植物拟南芥 | 第71-72页 |
| 3.9.1 、目的基因SmEIN3遗传转化模式植物拟南芥 | 第71-72页 |
| 四、总结与展望 | 第72-74页 |
| 4.1 、总结 | 第72-73页 |
| 4.2 、展望 | 第73-74页 |
| 五、参考文献 | 第74-78页 |
| 六、致谢 | 第78-79页 |
| 七、附件 | 第79-84页 |
