| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 第一章 双链 RNA 依赖的蛋白激酶 PKR 激酶结构域的结构解析 | 第9-31页 |
| 1 实验材料与方法 | 第10-19页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第10页 |
| 1.1.1 蛋白重组表达载体及其突变体的克隆相关主要实验材料 | 第10页 |
| 1.1.2 蛋白纯化相关主要实验试剂 | 第10页 |
| 1.1.3 结晶相关实验材料 | 第10页 |
| 1.2 仪器 | 第10-11页 |
| 1.3 实验方法 | 第11-19页 |
| 1.3.1 蛋白重组表达载体及其突变体的克隆方法 | 第11-15页 |
| 1.3.2 蛋白表达纯化 | 第15-17页 |
| 1.3.3 结晶条件的筛选与优化 | 第17-18页 |
| 1.3.4 超速离心分析 | 第18-19页 |
| 2 结果与讨论 | 第19-30页 |
| 2.1 蛋白纯化及晶体解析结果 | 第19-24页 |
| 2.2 PKR 激酶结构域的结构分析 | 第24-25页 |
| 2.3 PKR-KD 的二聚体结构 | 第25-30页 |
| 3 小结与展望 | 第30-31页 |
| 第二章 与 PDZ 结构域结合的激酶 PBK 的活性位点初步研究 | 第31-50页 |
| 1 材料与方法 | 第33-36页 |
| 1.1 主要实验材料 | 第33-34页 |
| 1.2 仪器 | 第34-36页 |
| 2 实验原理及过程 | 第36-45页 |
| 2.1 昆虫杆状病毒表达蛋白的原理 | 第36-37页 |
| 2.2 昆虫杆状病毒表达系统表达 PBK | 第37-43页 |
| 2.2.1 突变获得目的基因 | 第37页 |
| 2.2.2 将目的基因连接到载体 pFastBac 上 | 第37-38页 |
| 2.2.3 将目的基因转座到 DH10Bac 大肠杆菌细胞中的 bacmid 上 | 第38页 |
| 2.2.4 提取 bacmid 重组质粒 DNA | 第38-39页 |
| 2.2.5 检测转座是否成功 | 第39-40页 |
| 2.2.6 Bacmid 大质粒 DNA 转染进 SF9 细胞 | 第40-41页 |
| 2.2.7 收获病毒 P1 | 第41页 |
| 2.2.8 扩增病毒 P2 | 第41-42页 |
| 2.2.9 收获第二代病毒 P2 并检测 | 第42-43页 |
| 2.2.10 大量表达目的蛋白 | 第43页 |
| 2.3 PBK 的纯化 | 第43-45页 |
| 2.3.1 收菌并裂解 | 第43页 |
| 2.3.2 离心 | 第43页 |
| 2.3.3 Ni 柱纯化 | 第43页 |
| 2.3.4 Superdex200 纯化 | 第43页 |
| 2.3.5 PBK 的活性检测 | 第43页 |
| 2.3.6 PBK（T198E）的结晶 | 第43-45页 |
| 3 结果 | 第45-49页 |
| 3.1 突变关键位点成功表达了有活性的 PBK | 第45-47页 |
| 3.2 发现新的关键位点 | 第47-48页 |
| 3.3 晶体生长实验 | 第48-49页 |
| 4 小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 综述 | 第51-59页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| [附录] 研究生期间以第一作者公开发表的文章 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
