| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-19页 |
| 实验流程图 | 第19-20页 |
| 第二章 化学乏氧对人肺腺癌A549细胞生长及顺铂化疗敏感性的影响 | 第20-42页 |
| 2.1 材料试剂与主要实验设备 | 第20-21页 |
| 2.1.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 主要溶液及试剂配制 | 第21-24页 |
| 2.2.2 A549细胞培养 | 第24-25页 |
| 2.2.3 细胞组织免疫化学观察化学缺氧条件下A549细胞中HIF-1α蛋白的表达 | 第25-26页 |
| 2.2.4 Western blot检测化学缺氧条件下人肺腺癌A549细胞核蛋白中HIF-1α蛋白的表达 | 第26-28页 |
| 2.2.5 光镜、电镜下观察化学乏氧条件下A549细胞的微观结构变化 | 第28-29页 |
| 2.2.6 MTT法测定化学乏氧条件下A549细胞的生长、增殖 | 第29页 |
| 2.2.7 流式细胞仪检测化学乏氧条件下A549细胞细胞周期 | 第29-30页 |
| 2.2.8 MTT法测定化学乏氧条件下A549细胞顺铂IC_(50) | 第30页 |
| 2.2.9 AnnexinV-FITC/PI双染法检测化学乏氧条件下顺铂对A549细胞凋亡的影响 | 第30-31页 |
| 2.2.10 统计学方法 | 第31页 |
| 2.3 结果 | 第31-39页 |
| 2.3.1 化学乏氧条件下A549细胞中HIF-1α蛋白的表达 | 第31-33页 |
| 2.3.2 化学乏氧条件下光镜、电镜下观察A549细胞微观形态、结构的变化 | 第33-35页 |
| 2.3.3 化学乏氧对A549细胞的生长、增殖的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.4 化学乏氧对A549细胞周期的影响 | 第36-37页 |
| 2.3.5 化学乏氧对A549细胞顺铂IC_(50)的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.6 化学乏氧对顺铂诱导A549细胞凋亡的影响 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-42页 |
| 第三章 化学乏氧条件下NF-κBp65siRNA抑制NF-κB的激活下调A549细胞中HIF-1α的表达 | 第42-59页 |
| 3.1 材料试剂与主要实验设备 | 第42-43页 |
| 3.1.1 材料 | 第42页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第43页 |
| 3.1.4 real-timePCR 引物 | 第43页 |
| 3.2方法 | 第43-51页 |
| 3.2.1 主要溶液及试剂配制 | 第43-44页 |
| 3.2.2 A549细胞培养 | 第44页 |
| 3.2.3 细胞免疫荧光化学技术检测化学乏氧条件下A549细胞中NF-κBp65的表达 | 第44-45页 |
| 3.2.4 Western blot免疫印迹法检测化学乏氧A549细胞中NF-κB p65、HIF-1α蛋白的表达 | 第45-46页 |
| 3.2.5 real-timePCR检测化学乏氧条件下A549细胞中NF-κBp65 mRNA、HIF-1αmRNA的表达 | 第46-48页 |
| 3.2.6 Western blot法检测化学乏氧条件下HIF-1α特异性抑制剂YC-1对人肺腺癌A549细胞核蛋白中HIF-1α蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
| 3.2.7 NF-κB p65siRNA瞬时转染A549细胞 | 第49页 |
| 3.2.8 real-timePCR检测转染NF-κBp65siRNA对乏氧A549细胞中NF-κBp65 mRNA、HIF-1αmRNA转录的影响 | 第49-50页 |
| 3.2.9 Western blot印迹法检测转染NF-κB p65siRNA后对化学乏氧条件下A549细胞中NF-κBp65、HIF-1α蛋白表达的影响 | 第50页 |
| 3.2.10 统计学方法 | 第50-51页 |
| 3.3 结果 | 第51-56页 |
| 3.3.1 化学乏氧条件下A549细胞中NF-κBp65、HIF-1α蛋白的表达： | 第51-53页 |
| 3.3.2 化学乏氧条件下HIF-1α特异性抑制剂YC-1对A549细胞中HIF-1α蛋白表达影响 | 第53页 |
| 3.3.3 荧光显微镜下观察A549细胞转染NF-κBp65siRNA的效率 | 第53-54页 |
| 3.3.4 转染A549细胞NF-κBp65siRNA对化学乏氧条件下A549细胞中NF-κBp65及HIF-1α表达的影响 | 第54-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 NF-κBp65siRNA阻断NF-κB/HIF-1α通路激活增强化学缺氧人肺腺癌A549细胞顺铂化疗敏感性的研究 | 第59-75页 |
| 4.1 材料试剂与主要仪器 | 第59-60页 |
| 4.1.1 材料 | 第59页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第59-60页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第60页 |
| 4.2 方法 | 第60-64页 |
| 4.2.1 主要溶液及试剂配制 | 第60-61页 |
| 4.2.2 A549细胞培养 | 第61页 |
| 4.2.3 NF-κB p65siRNA瞬时转染A549细胞 | 第61页 |
| 4.2.4 MTT法测定转染NF-κB p65siRNA对化学乏氧条件下A549细胞顺铂IC_(50)的影响 | 第61-62页 |
| 4.2.5 AnnexinV/PI双染法检测转染NF-κB p65siRNA对化学乏氧条件下单独或联合顺铂对A549细胞凋亡的影响 | 第62页 |
| 4.2.6 Western blot印迹法检测转染NF-κB p65siRNA后对化学乏氧条件下A549细胞中p27、Bcl-2蛋白表达的影响 | 第62-63页 |
| 4.2.7 MTT法测定化学乏氧条件下A549细胞的生长、增殖 | 第63页 |
| 4.2.8 流式细胞仪检测转染NF-κB p65siRNA对化学乏氧条件下A549细胞细胞周期的影响 | 第63-64页 |
| 4.2.9 统计学方法 | 第64页 |
| 4.3 结果 | 第64-72页 |
| 4.3.1 转染A549细胞NF-κBp65siRNA对化学乏氧条件下A549细胞顺铂IC50的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.2 AnnexinV/PI双染法检测转染NF-κB p65siRNA单独或联合顺铂对化学乏氧条件下对A549细胞凋亡的影响 | 第65-67页 |
| 4.3.3 Western blot检测转染A549细胞NF-κBp65siRNA对化学乏氧条件下A549细胞中Bcl-2表达的影响 | 第67-68页 |
| 4.3.4 Western blot检测转染A549细胞NF-κBp65siRNA对化学乏氧条件下A549细胞中p27表达的影响 | 第68-69页 |
| 4.3.5 MTT检测转染NF-κB p65siRNA对化学乏氧条件下A549生长、增殖的影响 | 第69-70页 |
| 4.3.6 流式细胞仪检测转染NF-κB p65siRNA对化学乏氧条件下A549细胞周期分布的影响及与顺铂诱导细胞凋亡的相关分析 | 第70-72页 |
| 4.4 讨论 | 第72-75页 |
| 第五章 EGCG对CoCl_2化学乏氧条件下人肺腺癌A549细胞顺铂化疗敏感性的影响 | 第75-86页 |
| 5.1 材料试剂与主要仪器 | 第75-76页 |
| 5.1.1 材料 | 第75页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第75-76页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第76页 |
| 5.2 方法 | 第76-79页 |
| 5.2.1 主要溶液及试剂配制 | 第76页 |
| 5.2.2 A549细胞培养 | 第76-77页 |
| 5.2.3 MTT法测定化学乏氧条件下EGCG对A549细胞的生长抑制的影响 | 第77页 |
| 5.2.4 MTT法测定化学乏氧条件下EGCG联合顺铂对A549细胞的生长抑制的影响 | 第77-78页 |
| 5.2.5 Hoechst染色法测定各组A549细胞的凋亡 | 第78页 |
| 5.2.6 AnnexinV/PI双染法检测化学乏氧条件下EGCG单独或联合顺铂对A549细胞凋亡的影响 | 第78-79页 |
| 5.2.7 Western blot印迹法检测化学缺氧条件下EGCG单独或联合顺铂对A549细胞中Bcl-2蛋白表达的影响 | 第79页 |
| 5.2.8 统计学方法 | 第79页 |
| 5.3 结果 | 第79-83页 |
| 5.3.1 MTT检测化学乏氧条件下EGCG单独或联合顺铂对A549细胞生长抑制的影响 | 第79-80页 |
| 5.3.2 Hoechst染色法观察化学乏氧条件下EGCG单独或联合顺铂时A549细胞形态的改变 | 第80-81页 |
| 5.3.3 AnnexinV/PI双染法检测化学乏氧条件下EGCG单独或联合顺铂对A549细胞凋亡的影响 | 第81-83页 |
| 5.3.4 Western blot印迹法检测化学乏氧条件下EGCG单独或联合顺铂对A549细胞中Bcl-2蛋白表达的影响 | 第83页 |
| 5.4 讨论 | 第83-86页 |
| 第六章 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-96页 |
| 综述 | 第96-111页 |
| 参考文献 | 第104-111页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
