类芽孢杆菌B28抗氧化物质paenibactin的分离提纯、活性及结构鉴定
| 致谢 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第12-31页 |
| 参考文献 | 第24-31页 |
| 前言 | 第31-35页 |
| 材料与方法 | 第35-52页 |
| 1 菌株 | 第35页 |
| 2 培养基 | 第35-36页 |
| 3 主要试剂 | 第36-38页 |
| 3.1 革兰氏染色 | 第36-37页 |
| 3.2 分离纯化 | 第37页 |
| 3.3 DNA超螺旋破坏实验 | 第37页 |
| 3.4 DPPH自由基清除实验 | 第37页 |
| 3.5 氨基酸分析 | 第37页 |
| 3.6 铁载体检测 | 第37-38页 |
| 4 主要器材 | 第38-39页 |
| 5 基于16S rDNA的B28菌株鉴定 | 第39-43页 |
| 5.1 基因组DNA的提取 | 第39页 |
| 5.2 16S rDNA的扩增 | 第39-40页 |
| 5.3 目的条带的切胶回收 | 第40-41页 |
| 5.4 目的DNA与载体连接 | 第41页 |
| 5.5 感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| 5.6 连接产物转化感受态细胞 | 第42页 |
| 5.7 白色菌落PCR验证 | 第42-43页 |
| 5.8 16S rDNA基因测序及同源性分析 | 第43页 |
| 6 发酵液抗氧化活性的检测 | 第43页 |
| 6.1 FRAP法所用试剂 | 第43页 |
| 6.2 抗氧化活性测定步骤 | 第43页 |
| 7 菌株发酵流程 | 第43-44页 |
| 7.1 菌株活化 | 第43-44页 |
| 7.2 发酵培养基选定 | 第44页 |
| 7.3 扩大培养 | 第44页 |
| 8. 目标产物的分离纯化 | 第44-45页 |
| 8.1 粗提物的制备 | 第44页 |
| 8.2 使用SPE C18小柱进一步分离 | 第44-45页 |
| 8.3 反相HPLC分离纯化 | 第45页 |
| 9 抗氧化能力和稳定性测定 | 第45-50页 |
| 9.1 FRAP法测定总抗氧化能力 | 第45-46页 |
| 9.2 DPPH法测定自由基清除能力 | 第46-47页 |
| 9.3 超螺旋DNA解链实验 | 第47-50页 |
| 9.4 化合物抗氧化能力稳定性测定 | 第50页 |
| 10 结构鉴定 | 第50-52页 |
| 10.1 HPLC测定样品纯度 | 第50-51页 |
| 10.2 质谱与核磁分析 | 第51页 |
| 10.3 氨基酸组成手性分析 | 第51页 |
| 10.4 铁离子对产量的影响 | 第51-52页 |
| 结果与讨论 | 第52-73页 |
| 1 菌株B28的鉴定 | 第52-54页 |
| 1.1 形态特征 | 第52页 |
| 1.2 16S rDNA序列分析 | 第52-54页 |
| 2 菌株发酵与产物分离提纯 | 第54-56页 |
| 2.1 发酵培养基的选择 | 第54页 |
| 2.2 查找目标产物 | 第54-55页 |
| 2.3 目标化合物的粗提 | 第55-56页 |
| 2.4 目标化合物的精纯 | 第56页 |
| 3 化合物的抗氧化活性测定 | 第56-62页 |
| 3.1 化合物A分子量的确定 | 第56-57页 |
| 3.2 FRAP法测定总抗氧化能力实验结果 | 第57-58页 |
| 3.3 DPPH法测定自由基清除能力实验结果 | 第58-59页 |
| 3.4 超螺旋DNA解链实验结果 | 第59-60页 |
| 3.5 化合物A抗氧化能力稳定性实验结果 | 第60-62页 |
| 4 化合物的结构分析 | 第62-73页 |
| 4.1 HPLC初步对比检测 | 第62页 |
| 4.2 二级质谱检测 | 第62-63页 |
| 4.3 氨基酸手性分析 | 第63-65页 |
| 4.4 核磁共振碳氢波谱检测 | 第65-68页 |
| 4.5 化合物抗氧化机理初探 | 第68-69页 |
| 4.6 培养基中铁离子对产量的影响 | 第69-73页 |
| 结论 | 第73页 |
| 创新点 | 第73-74页 |
| 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 攻读学位期间已发表的论文 | 第82页 |
