| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 链霉菌(Streptomycetaceae) | 第12页 |
| 1.2 龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus) | 第12页 |
| 1.3 链霉菌形态发育与次级代谢调控研究 | 第12-15页 |
| 1.3.1 链霉菌形态发育 | 第13-14页 |
| 1.3.2 链霉菌的次级代谢 | 第14-15页 |
| 1.4 σ因子研究进展 | 第15-18页 |
| 1.4.1 σ~(70)和σ~(54)家族 | 第16-18页 |
| 1.5 链霉菌中与胁迫调节相关σ因子 | 第18-22页 |
| 1.5.1 胁迫和发育双重诱导的σ因子 | 第19-21页 |
| 1.5.2 形态发育相关的σ因子 | 第21页 |
| 1.5.3 抗生素合成相关胁迫调节σ因子 | 第21页 |
| 1.5.4 其他与胁迫应答相关σ因子 | 第21-22页 |
| 1.6 链霉菌中的抗σ因子 | 第22页 |
| 1.7 σ因子的调控基因 | 第22-23页 |
| 1.8 研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-34页 |
| 2.1 菌株 | 第24页 |
| 2.2 质粒 | 第24页 |
| 2.3 引物 | 第24-25页 |
| 2.4 培养基配方 | 第25页 |
| 2.5 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.5.1 常规试剂 | 第25-26页 |
| 2.5.2 试剂盒 | 第26页 |
| 2.6 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.7 链霉菌基因组DNA提取 | 第27-28页 |
| 2.8 PCR反应体系 | 第28页 |
| 2.9 琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.10 PCR扩增产物的纯化 | 第28页 |
| 2.11 基因的酶切与连接 | 第28-29页 |
| 2.12 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.13 质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第29-30页 |
| 2.14 DNA的测序 | 第30页 |
| 2.15 外源融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第30页 |
| 2.16 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2.16.1 12%分离胶的制备 | 第30-31页 |
| 2.16.2 5%浓缩胶的配置 | 第31页 |
| 2.17 电击转用所需的S.rimosus感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.18. S.rimosus中电击转化质粒 | 第31-32页 |
| 2.19 S.rimosus总RNA的提取 | 第32页 |
| 2.20 cDNA的合成 | 第32页 |
| 2.21 Quantitative RT-PCR | 第32-33页 |
| 2.22 转录量的计算 | 第33页 |
| 2.23 S.rimosus的发酵方法 | 第33页 |
| 2.24 发酵过程中菌体干重的测定 | 第33-34页 |
| 第三章 龟裂链霉菌产红色素条件的初步探索 | 第34-46页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 材料与方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 环境胁迫下的培养 | 第34-35页 |
| 3.2.2 红色素的提取方法 | 第35页 |
| 3.2.3 番茄红素的HPLC分析 | 第35-36页 |
| 3.2.4 rsigB基因的获得 | 第36-38页 |
| 3.2.5 整合质粒(pSET152-rsigB)的构建及去甲基化 | 第38页 |
| 3.2.6 PCR鉴定转化子 | 第38页 |
| 3.2.7 PCR鉴定重组质粒的整合方式 | 第38页 |
| 3.2.8 RT-PCR鉴定类胡萝卜素合成途经 | 第38页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第38-44页 |
| 3.3.1 环境胁迫下的培养结果 | 第38-40页 |
| 3.3.2 不同萃取条件下红色素的HPLC检测 | 第40页 |
| 3.3.3 重组质粒pSET152-rsigB的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.4 重组质粒pSET152-rsigB的酶切验证 | 第41页 |
| 3.3.5 转化子的筛选鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.6 转化子整合方式的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.7 RT-PCR鉴定类胡萝卜素合成途经 | 第43-44页 |
| 3.4 本章小结 | 第44-46页 |
| 第四章 龟裂链霉菌rsigB的功能预测及在E.coli中异源表达 | 第46-58页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 材料与方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 RsigB同源性分析以及功能预测 | 第46页 |
| 4.2.2 rsigB在大肠杆菌中的异源表达 | 第46-48页 |
| 4.2.3 E.coli BL21(DE3)生长曲线的制作 | 第48页 |
| 4.2.4 重组菌株E.coli BL21(DE3)/pET28a-rsigB对多种环境胁迫培养 | 第48页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第48-57页 |
| 4.3.1 RsigB的生物信息学分析 | 第48-51页 |
| 4.3.2 重组质粒pET28a-rsigB构建 | 第51-52页 |
| 4.3.3 RsigB在E.coli BL21(DE3)中的诱导表达 | 第52页 |
| 4.3.4 大肠杆菌的生长曲线 | 第52-53页 |
| 4.3.5 重组菌株E.coli BL21(DE3)/pET28a-rsigB对高温耐受性分析 | 第53-54页 |
| 4.3.6 重组菌株E.coli BL21(DE3)/pET28a-rsigB对渗透压耐受性分析 | 第54-55页 |
| 4.3.7 重组菌株E.coli BL21(DE3)/pET28a-rsigB对氧化胁迫耐受性分析 | 第55-56页 |
| 4.3.8 重组菌株Ecoli BL21(DE3)/pET28a-rsigB对低pH的耐受性分析 | 第56-57页 |
| 4.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第五章 RsigB对龟裂链霉菌胁迫调节作用以及形态发育的研究 | 第58-68页 |
| 5.1 引言 | 第58页 |
| 5.2 材料与方法 | 第58-60页 |
| 5.2.1 rsigB阻断菌株的构建 | 第58-59页 |
| 5.2.2 阻断株的筛选及鉴定 | 第59页 |
| 5.2.3 rsigB阻断菌株的表型分析 | 第59-60页 |
| 5.2.4 抗逆胁迫耐受性分析 | 第60页 |
| 5.2.5 rsigB突变株形态分化转录水平的分析 | 第60页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第60-67页 |
| 5.3.1 重组质粒pKC1139-rsigB的构建 | 第60-61页 |
| 5.3.2 筛选结果与鉴定 | 第61页 |
| 5.3.3 PCR验证转化子 | 第61-62页 |
| 5.3.4 rsigB缺失对S.rimosus形态分化的影响 | 第62页 |
| 5.3.5 环境压力对S.rimosus生长的胁迫 | 第62-65页 |
| 5.3.6 转录水平分析rsigB突变株对S.rimous形态分化的影响 | 第65-67页 |
| 5.4 本章小结 | 第67-68页 |
| 第六章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 6.1 结论 | 第68页 |
| 6.2 展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
