| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第16-23页 |
| 1.1 埃博拉病毒概述 | 第16-18页 |
| 1.1.1 埃博拉出血热的流行病学 | 第16页 |
| 1.1.2 埃博拉病毒的分类和形态结构 | 第16页 |
| 1.1.3 埃博拉病毒的基因组结构及功能 | 第16-18页 |
| 1.2 CNX、CRT蛋白的结构和功能 | 第18-21页 |
| 1.2.1 CNX、CRT的结构和结合位点 | 第18-19页 |
| 1.2.2 CNX、CRT的功能研究 | 第19-20页 |
| 1.2.3 CNX、CRT与病毒相互作用的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9技术 | 第21-22页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 利用CRISPR/Cas9技术构建CNX/CRT D.KO的细胞系 | 第23-30页 |
| 2.1 材料和方法 | 第23-27页 |
| 2.1.1 细胞和质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂和抗体 | 第23页 |
| 2.1.3 主要的仪器设备 | 第23页 |
| 2.1.4 细胞培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.5 蛋白免疫印迹（Western blot）所用试剂及溶液 | 第24页 |
| 2.1.6 Western blot检测 | 第24-25页 |
| 2.1.7 CNX gRNA引物的设计和质粒的构建 | 第25-26页 |
| 2.1.8 CNX基因敲除单克隆细胞株的筛选及序列分析 | 第26-27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-28页 |
| 2.2.1 CNX基因敲除gRNA的构建 | 第27页 |
| 2.2.2 CNX gRNA转染 48 h后的荧光检测 | 第27-28页 |
| 2.2.3 CNX基因缺失后在CRT KO细胞中的表达 | 第28页 |
| 2.2.4 CNX基因缺失后基因测序 | 第28页 |
| 2.3 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 CNX、CRT对GP蛋白成熟机制的研究 | 第30-50页 |
| 3.1 材料和方法 | 第30-36页 |
| 3.1.1 细胞和质粒 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂和抗体 | 第30页 |
| 3.1.3 主要的仪器设备 | 第30-31页 |
| 3.1.4 细胞培养基 | 第31页 |
| 3.1.5 GP蛋白在CNX、CRT敲除细胞系中的蛋白表达和伪病毒组装 | 第31页 |
| 3.1.6 CNX、CRT过表达对埃博拉病毒囊膜糖蛋白表达的影响 | 第31页 |
| 3.1.7 内源性CNX与GP之间的相互作用研究 | 第31-32页 |
| 3.1.8 外源性CRT与GP之间的相互作用研究 | 第32页 |
| 3.1.9 EBOV GP编码基因糖基化位点的突变 | 第32-34页 |
| 3.1.10 含糖基化位点突变的GP基因在细胞内表达和重组假病毒的包装 | 第34页 |
| 3.1.11 含糖基化位点突变的GP基因包装假病毒的感染力比较分析 | 第34页 |
| 3.1.12 外源性CNX与糖链组合缺失GP蛋白相互作用的研究 | 第34-35页 |
| 3.1.13 内源性CRT与糖链缺失GP蛋白相互作用的研究 | 第35页 |
| 3.1.14 Endo H酶对GP糖链组合缺失突变体的消化差异分析 | 第35页 |
| 3.1.15 CNX、CRT蛋白对EBOV全长GP蛋白表达及病毒组装能力的影响 | 第35-36页 |
| 3.2 结果与分析 | 第36-47页 |
| 3.2.1 CNX、CRT蛋白缺失抑制了EBOV GP蛋白表达和伪病毒组装 | 第36页 |
| 3.2.2 CNX、CRT过表达对埃博拉病毒囊膜糖蛋白表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.3 内源性CNX与GP之间存在相互作用 | 第37-38页 |
| 3.2.4 外源性CRT与GP之间存在相互作用 | 第38-39页 |
| 3.2.5 EBOV GP编码基因糖基化位点的突变 | 第39页 |
| 3.2.6 GP蛋白单点糖链缺失对细胞内蛋白表达和病毒组装的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.7 GP蛋白N-端糖链依次缺失对细胞内蛋白表达和病毒组装的影响 | 第40-41页 |
| 3.2.8 GP蛋白糖链组合缺失后对细胞内蛋白表达和病毒组装的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.9 GP蛋白糖链组合缺失包装伪病毒的感染差异 | 第42页 |
| 3.2.10 外源性CNX与糖链组合缺失GP蛋白相互作用的研究 | 第42-43页 |
| 3.2.11 内源性CRT与糖链组合缺失GP蛋白相互作用的研究 | 第43页 |
| 3.2.12 Endo H酶对GP糖链组合缺失突变体的消化差异分析 | 第43-45页 |
| 3.2.13 CNX、CRT蛋白对EBOV全长GP蛋白表达及病毒组装能力的影响 | 第45-47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-50页 |
| 第四章 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
