| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 马克思克鲁维酵母作为发酵菌株的优势 | 第12页 |
| 1.2 马克思克鲁维酵母的工业应用 | 第12-15页 |
| 1.2.1 生产耐热酶类 | 第13页 |
| 1.2.2 生产乙醇或木糖醇 | 第13-15页 |
| 1.3 马克思克鲁维酵母的研究方向 | 第15-19页 |
| 1.4 本论文代谢工程改造思路 | 第19-20页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第20-42页 |
| 2.1 实验试剂与设备 | 第20-21页 |
| 2.1.1 实验所用培养基 | 第20页 |
| 2.1.2 实验使用酶与试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验使用的仪器设备 | 第21页 |
| 2.2 实验菌株、载体及引物 | 第21-23页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第21-22页 |
| 2.2.2 实验所用引物 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| 2.3.2 大肠杆菌的化学法转化 | 第24页 |
| 2.3.3 质粒提取 | 第24-25页 |
| 2.3.4 凝胶中DNA以及PCR产物的回收 | 第25页 |
| 2.3.5 酶切产物或PCR产物的纯化 | 第25页 |
| 2.3.6 DNA的乙醇沉淀法回收 | 第25-26页 |
| 2.3.7 马克斯克鲁维酵母的转化 | 第26页 |
| 2.3.8 提取酵母基因组的方法 | 第26-27页 |
| 2.3.9 酵母RNA提取的流程 | 第27页 |
| 2.3.10 RNA反转录合成cDNA | 第27-28页 |
| 2.3.11 RT-PCR程序 | 第28页 |
| 2.3.12 Bradford法测定蛋白含量 | 第28页 |
| 2.3.13 酵母糖类代谢分析培养及发酵流程 | 第28-29页 |
| 2.3.14 XR、DH、XK酶活的测定 | 第29页 |
| 2.4 质粒与菌株的构建 | 第29-42页 |
| 2.4.1 KmHXK的克隆 | 第29-31页 |
| 2.4.2 KmHXK基因敲除框的构建 | 第31-33页 |
| 2.4.3 KmGLK的克隆 | 第33-34页 |
| 2.4.4 KmGLK基因敲除框的构建 | 第34-35页 |
| 2.4.5 KmGLK基因过表达质粒的构建 | 第35-37页 |
| 2.4.6 KmMIG1的克隆 | 第37-38页 |
| 2.4.7 KmMIG1基因敲除框的构建 | 第38-39页 |
| 2.4.8 基因工程改造马克斯克鲁维酵母工程菌株 | 第39-40页 |
| 2.4.9 基因工程改造马克斯克鲁维酵母木糖醇生产菌株 | 第40-42页 |
| 第3章 实验结果和讨论 | 第42-64页 |
| 3.1 葡萄糖抑制相关基因的敲除与表型分析 | 第42-47页 |
| 3.1.1 葡萄糖抑制相关基因的敲除 | 第42-43页 |
| 3.1.2 葡萄糖类似物(2-DG)鉴定敲除菌株葡萄糖抑制效应 | 第43-45页 |
| 3.1.3 通过混合碳源的利用鉴定葡萄糖抑制效应 | 第45-47页 |
| 3.2 在YLM001的基础上过表达KmGLK对酵母生长的影响 | 第47-49页 |
| 3.3 YLM001基础上过表达KmGLK对酵母葡萄糖抑制效应的影响 | 第49-57页 |
| 3.3.1 混合碳源利用的结果 | 第49-50页 |
| 3.3.2 葡萄糖类似物2-DG鉴定敲除菌株葡萄糖抑制效应 | 第50-51页 |
| 3.3.3 Real-time PCR分析 | 第51-55页 |
| 3.3.4 木糖代谢酶类酶活分析 | 第55-57页 |
| 3.4 改造生产木糖醇的菌株验证发酵 | 第57-61页 |
| 3.4.1 低OD发酵中单糖及木糖醇含量的分析 | 第57-59页 |
| 3.4.2 高OD发酵中单糖及木糖醇含量的分析 | 第59-61页 |
| 3.5 小结 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第72页 |
