| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第10-26页 |
| 1.1 石斑鱼研究概况 | 第10-12页 |
| 1.2 石斑鱼虹彩病毒研究概况 | 第12-19页 |
| 1.2.1 虹彩病毒结构及分类 | 第12-13页 |
| 1.2.2 石斑鱼虹彩病毒概述 | 第13-14页 |
| 1.2.3 新加坡石斑鱼虹彩病毒研究进展 | 第14-19页 |
| 1.3 PKR基因的研究进展 | 第19-25页 |
| 1.3.1 PKR的结构特点 | 第19-25页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 2 实验材料与实验方法 | 第26-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-30页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第26页 |
| 2.1.2 细胞和病毒 | 第26页 |
| 2.1.3 质粒载体和菌株 | 第26页 |
| 2.1.4 细菌培养基和细胞培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.5 酶类及相关标准品 | 第27页 |
| 2.1.6 实验所用试剂盒 | 第27页 |
| 2.1.7 核酸电泳相关试剂 | 第27页 |
| 2.1.8 蛋白电泳相关试剂 | 第27-29页 |
| 2.1.9 本文所用引物 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-42页 |
| 2.2.1 鱼体组织样品采集 | 第30页 |
| 2.2.2 总RNA样品的提取和反转录获得cDNA | 第30-31页 |
| 2.2.3 Real-time PCR | 第31页 |
| 2.2.4 石斑鱼PKR,HRI,eIF的序列扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.5 PCR产物的回收纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.6 从质粒载体菌DH5α中提取质粒pET-32a,pcDNA3.1和pEGFP-N3 | 第33-34页 |
| 2.2.7 HRI,PKR,eIF的pET-32a,pcDNA3.1和pEGFP-N3载体构建 | 第34页 |
| 2.2.8 感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.9 大肠杆菌的转化实验 | 第35页 |
| 2.2.10 菌液PCR筛选阳性克隆和测序 | 第35页 |
| 2.2.11 重组蛋白的诱导表达 | 第35-38页 |
| 2.2.12 去内毒素质粒的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.13 细胞转染 | 第39-40页 |
| 2.2.14 用荧光倒置显微镜观察PKR的亚细胞定位 | 第40页 |
| 2.2.15 细胞总RNA提取 | 第40-41页 |
| 2.2.16 萤光素酶报告基因实验 | 第41-42页 |
| 2.3 数据分析 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-54页 |
| 3.1 石斑鱼PKR和HRI基因扩增和序列分析 | 第43-45页 |
| 3.2 石斑鱼的PKR和HRI与已报到物种的氨基酸序列比对 | 第45-46页 |
| 3.3 石斑鱼HRI和PKR基因的组织表达分析 | 第46-47页 |
| 3.4 石斑鱼HRI经热休克处理后的表达量变化 | 第47-48页 |
| 3.5 病毒诱导HRI与PKR基因的表达 | 第48-50页 |
| 3.6 PKR的原核表达和抗体制备 | 第50-51页 |
| 3.7 PKR抗体制备和检测 | 第51页 |
| 3.8 PKR的亚细胞定位分析 | 第51-52页 |
| 3.9 过表达PKR和HRI对NF-κB的调节 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 全文总结和今后工作展望 | 第56-57页 |
| 全文总结 | 第56页 |
| 未来工作展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
