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拟南芥光响应F-box蛋白FOF2在开花起始调节中的功能与生化分析

摘要第5-7页
ABSTRACT第7-8页
英文缩略词第13-15页
第1章 绪论第15-29页
    1.1 拟南芥控制开花时间的分子机理第15-23页
        1.1.1 光周期途径第15-18页
        1.1.2 春化途径第18-19页
        1.1.3 自主途径第19-20页
        1.1.4 赤霉素途径第20-21页
        1.1.5 温度途径第21-22页
        1.1.6 年龄途径第22-23页
    1.2 26S蛋白酶体途径第23-28页
        1.2.1 泛素-26S蛋白酶体系统的组成第23-24页
        1.2.2 E3s第24-25页
        1.2.3 F-box家族第25-26页
        1.2.4 F-box家族与植物生长发育第26-28页
    1.3 本论文工作设想第28-29页
第2章 FOF2参与调控拟南芥开花第29-51页
    2.1 实验材料与方法第29-39页
        2.1.1 实验材料第29页
        2.1.2 拟南芥种子灭菌消毒与植物培养第29-30页
        2.1.3 植物DNA的提取第30页
        2.1.4 植物总RNA提取第30-31页
        2.1.5 RNA逆转录成c DNA第31页
        2.1.6 实时荧光定量PCR第31页
        2.1.7 半定量RT-PCR第31-32页
        2.1.8 质粒提取第32页
        2.1.9 琼脂糖凝胶回收第32-33页
        2.1.10 大肠杆菌感受态制备与热激转化第33-34页
        2.1.11 基因克隆与载体构建第34-35页
        2.1.12 农杆菌感受态的制备及电击转化第35-36页
        2.1.13 拟南芥转化与转基因植物的筛选第36-37页
        2.1.14 植物总蛋白提取与免疫印迹( Western blott ing)第37-38页
        2.1.15 拟南芥开花时间统计第38页
        2.1.16 CRISPR/CAS9载体改造与构建第38-39页
    2.2 结果与分析第39-49页
        2.2.1 FOF2过表达使拟南芥开花延迟第39页
        2.2.2 过表达FOF2ΔF突变蛋白促进拟南芥开花第39-43页
        2.2.3 FOF2蛋白结构及其同源基因分析第43-46页
        2.2.4 fof2fol1双缺失突变体开花提前第46-49页
    2.3 本章小结第49-51页
第3章 FOF2基因表达模式分析第51-62页
    3.1 实验材料与方法第51-56页
        3.1.1 实验材料第51页
        3.1.2 烟草叶片瞬时表达第51-52页
        3.1.3 拟南芥原生质体制备与转化第52-53页
        3.1.4 免疫共沉淀( Co-IP)第53-54页
        3.1.5 FOF2转录自激活活性分析第54-56页
        3.1.6 拟南芥种子灭菌消毒与植物培养第56页
        3.1.7 植物总RNA提取第56页
        3.1.8 RNA逆转录成c DNA第56页
        3.1.9 实时荧光定量PCR第56页
        3.1.10 基因克隆与载体构建第56页
        3.1.11 植物总蛋白提取与免疫印迹( Western blott ing)第56页
    3.2 结果与分析第56-61页
        3.2.1 FOF2的组织器官表达分析第56-57页
        3.2.2 FOF2蛋白亚细胞定位分析第57页
        3.2.3 FOF2蛋白转录活性分析第57-59页
        3.2.4 FOF2蛋白与ASK家族蛋白互作分析第59-61页
    3.3 本章小结第61-62页
第4章 FOF2通过促进FLC基因表达抑制拟南芥开花第62-80页
    4.1 实验材料与方法第62-66页
        4.1.1 实验材料第62页
        4.1.2 染色质免疫共沉淀( Ch-IP)第62-64页
        4.1.3 酵母双杂交第64-65页
        4.1.4 春化处理第65页
        4.1.5 GA处理第65页
        4.1.6 拟南芥种子灭菌消毒与植物培养第65页
        4.1.7 植物总RNA提取第65页
        4.1.8 RNA逆转录成c DNA第65页
        4.1.9 实时荧光定量PCR第65页
        4.1.10 基因克隆与载体构建第65-66页
        4.1.11 植物总蛋白提取与免疫印迹( Western blott ing)第66页
    4.2 结果与分析第66-78页
        4.2.1 FOF2过表达或者缺失对开花相关基因表达的影响第66-69页
        4.2.2 FOF2与FLC基因的遗传互作分析第69-71页
        4.2.3 FOF2在拟南芥花芽分化时期的表达分析第71-72页
        4.2.4 FOF2蛋白与FLC基因组序列互作分析第72-73页
        4.2.5 FOF2蛋白与自主开花途径调节子相互作用分析第73-74页
        4.2.6 FOF2在不同开花途径基因突变体中的表达分析第74-76页
        4.2.7 FOF2过表达植株开花对低温春化的响应第76页
        4.2.8 FOF2过表达植株开花对赤霉素(GA)的响应第76-78页
    4.3 本章小结第78-80页
第5章 光调控FOF2基因的表达第80-88页
    5.1 实验材料与方法第80-81页
        5.1.1 实验材料第80页
        5.1.2 MG132处理第80页
        5.1.3 Cyclo heximide(CHX)处理第80页
        5.1.4 拟南芥下胚轴长度分析第80-81页
        5.1.5 拟南芥种子灭菌消毒与植物培养第81页
        5.1.6 植物总RNA提取第81页
        5.1.7 RNA逆转录成c DNA第81页
        5.1.8 实时荧光定量PCR第81页
        5.1.9 植物总蛋白提取与免疫印迹( Western blott ing)第81页
    5.2 结果与分析第81-87页
        5.2.1 不同光照条件对FOF2的m RNA表达的影响第81-82页
        5.2.2 不同光照条件对FOF2蛋白表达的影响第82-84页
        5.2.3 FOF2蛋白降解分析第84-85页
        5.2.4 COP1对FOF2蛋白稳定性的影响第85-87页
    5.3 本章小结第87-88页
结论第88-90页
参考文献第90-103页
附录A(攻读博士学位期间发表的学术论文目录)第103-105页
附录B第105-110页
致谢第110页

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