| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 主要英文缩略词表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-28页 |
| 1.1 蛇副黏病毒的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.1.1 Ferlavirus的形态和结构 | 第17页 |
| 1.1.2 Ferlavirus基因组编码蛋白的特性 | 第17-19页 |
| 1.1.3 Ferlavirus的分离鉴定 | 第19-20页 |
| 1.2 病毒体外培养研究进展 | 第20-24页 |
| 1.2.1 转瓶培养 | 第20页 |
| 1.2.2 多层平板培养系统 | 第20页 |
| 1.2.3 生物反应器培养 | 第20页 |
| 1.2.4 病毒无血清培养 | 第20-22页 |
| 1.2.5 微载体培养 | 第22-24页 |
| 1.3 Ferlavirus的诊断方法 | 第24-27页 |
| 1.3.1 血清学方法 | 第24-25页 |
| 1.3.2 分子生物学诊断技术研究进展 | 第25-27页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第27-28页 |
| 第二章 Ferlavirus阳性病例的检测 | 第28-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 试验样品 | 第28页 |
| 2.1.2 实验试剂及其配制 | 第28-29页 |
| 2.1.3 试验仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 试验方法 | 第30-32页 |
| 2.2.1 实验样品准备 | 第30页 |
| 2.2.2 样品RNA抽提 | 第30页 |
| 2.2.3 反转录(RT) | 第30-31页 |
| 2.2.4 聚合酶链式反应(PCR) | 第31-32页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32页 |
| 2.4 分析和讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 Ferlavirus在Vero细胞中的培养 | 第33-54页 |
| 3.1 试验材料 | 第33-41页 |
| 3.1.1 试验细胞 | 第33页 |
| 3.1.2 试验样品 | 第33页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第33-35页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第35-36页 |
| 3.1.5 培养基的配制 | 第36-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-48页 |
| 3.2.1 Vero细胞的复苏 | 第41-42页 |
| 3.2.2 Vero细胞的传代 | 第42页 |
| 3.2.3 Vero细胞的无血清驯化 | 第42-43页 |
| 3.2.4 用MTT比色法检测Vero细胞无血清驯化的结果 | 第43-44页 |
| 3.2.5 Ferlavirus在Vero细胞中的适应 | 第44页 |
| 3.2.6 通过红细胞凝集试验(HA试验)初步检测病毒 | 第44-45页 |
| 3.2.7 病毒RNA的抽提 | 第45页 |
| 3.2.8 反转录(RT) | 第45-46页 |
| 3.2.9 链式聚合酶反应(PCR) | 第46-47页 |
| 3.2.10 凝胶电泳检测 | 第47-48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-53页 |
| 3.3.1 Vero细胞的复苏和传代 | 第48页 |
| 3.3.2 Vero细胞的无血清驯化培养 | 第48-51页 |
| 3.3.3 无血清状态下Ferlavirus在Vero细胞中的适应生长 | 第51-52页 |
| 3.3.4 细胞培养产物中Ferlavirus的检测 | 第52-53页 |
| 3.4 分析和讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 Ferlavirus保存方法的研究 | 第54-62页 |
| 4.1 试验材料 | 第54-56页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第54页 |
| 4.1.2 实验试剂及其配制 | 第54-55页 |
| 4.1.3 试验仪器 | 第55-56页 |
| 4.2 试验方法 | 第56-58页 |
| 4.2.1 实验样品准备 | 第56页 |
| 4.2.2 血球凝集(HA)试验 | 第56页 |
| 4.2.3 温度敏感性试验 | 第56-57页 |
| 4.2.4 有机溶剂敏感性试验 | 第57-58页 |
| 4.2.5 酸性溶液敏感性试验 | 第58页 |
| 4.3 实验结果 | 第58-60页 |
| 4.3.1 血球凝集(HA)试验 | 第58-59页 |
| 4.3.2 温度敏感性试验 | 第59-60页 |
| 4.3.3 有机溶剂敏感性试验 | 第60页 |
| 4.3.4 酸性溶液敏感性试验 | 第60页 |
| 4.4 分析和讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 Ferlavirus的分段测序 | 第62-69页 |
| 5.1 实验材料 | 第62-65页 |
| 5.1.1 实验样品 | 第62页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第62-63页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第63-64页 |
| 5.1.4 培养基配制 | 第64-65页 |
| 5.2 实验方法 | 第65-68页 |
| 5.2.1 病毒RNA抽提 | 第65页 |
| 5.2.2 RNA质量鉴定 | 第65页 |
| 5.2.3 反转录(RT) | 第65-66页 |
| 5.2.4 链式聚合酶反应(PCR) | 第66-67页 |
| 5.2.5 电泳分析 | 第67页 |
| 5.2.6 PCR产物回收 | 第67页 |
| 5.2.8 目的基因连接 | 第67-68页 |
| 5.2.9 转化 | 第68页 |
| 5.2.10 重组质粒的PCR鉴定 | 第68页 |
| 5.3 试验结果 | 第68-69页 |
| 5.3.1 目的基因片段PCR扩增 | 第68页 |
| 5.3.2 重组质粒的鉴定 | 第68页 |
| 5.3.3 测序及拼接结果 | 第68-69页 |
| 第六章 实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 | 第69-84页 |
| 6.1 实验材料 | 第69-72页 |
| 6.1.1 实验样品 | 第69页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第69-70页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第70-71页 |
| 6.1.4 培养基配制 | 第71-72页 |
| 6.2 实验方法 | 第72-79页 |
| 6.2.1 病毒RNA抽提 | 第72页 |
| 6.2.2 RNA质量鉴定 | 第72页 |
| 6.2.3 反转录(RT) | 第72-73页 |
| 6.2.4 链式聚合酶反应(PCR) | 第73-74页 |
| 6.2.5 电泳分析 | 第74页 |
| 6.2.6 PCR产物回收 | 第74-75页 |
| 6.2.8 目的基因连接 | 第75页 |
| 6.2.9 转化 | 第75页 |
| 6.2.10 重组质粒的PCR鉴定 | 第75页 |
| 6.2.11 重组质粒的大量制备 | 第75页 |
| 6.2.12 标准品浓度计算 | 第75页 |
| 6.2.13 实时荧光定量PCR反应条件的初步探索 | 第75-77页 |
| 6.2.14 实时荧光定量PCR的标曲建立 | 第77页 |
| 6.2.15 荧光定量PCR检测方法的建立 | 第77-78页 |
| 6.2.16 特异性试验 | 第78页 |
| 6.2.17 敏感性试验 | 第78页 |
| 6.2.18 重复性和稳定性试验 | 第78-79页 |
| 6.3 试验结果 | 第79-84页 |
| 6.3.1 目的基因片段PCR扩增 | 第79页 |
| 6.3.2 重组质粒的鉴定 | 第79-80页 |
| 6.3.3 标准品的制备及拷贝数测定 | 第80页 |
| 6.3.4 荧光定量PCR检测方法的建立 | 第80-82页 |
| 6.3.5 特异性试验 | 第82-83页 |
| 6.3.6 敏感性试验 | 第83页 |
| 6.3.7 重复性和稳定性试验 | 第83-84页 |
| 第七章 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-92页 |
| 附录一 | 第92-102页 |
| 附录二 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
