| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩写词表 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-42页 |
| 1.1 研究背景 | 第18页 |
| 1.2 研究现状 | 第18-28页 |
| 1.2.1 猴B病毒的生物学特征 | 第18-19页 |
| 1.2.2 猴B病毒的病毒增殖周期 | 第19-20页 |
| 1.2.3 猴B病毒的理化特征 | 第20页 |
| 1.2.4 猴B病毒的基因组结构 | 第20-22页 |
| 1.2.5 猴B病毒的细胞培养 | 第22页 |
| 1.2.6 致病性及临床症状 | 第22-23页 |
| 1.2.7 猴B病毒的检测方法 | 第23-25页 |
| 1.2.8 猴B病毒的治疗与预防 | 第25-27页 |
| 1.2.9 单克隆抗体在猴B病毒研究中的应用 | 第27-28页 |
| 1.3 抗原与抗体 | 第28-37页 |
| 1.3.1 抗原简介 | 第28页 |
| 1.3.2 抗原的制备 | 第28-30页 |
| 1.3.3 抗体简介 | 第30-32页 |
| 1.3.4 抗原与抗体的反应 | 第32-33页 |
| 1.3.5 抗体的制备 | 第33-37页 |
| 1.3.5.1 多克隆抗体的制备 | 第33-34页 |
| 1.3.5.2 单克隆抗体的制备 | 第34-37页 |
| 1.4 免疫分析 | 第37-39页 |
| 1.4.1 Western blot分析方法 | 第37-38页 |
| 1.4.2 酶联免疫吸附分析方法 | 第38页 |
| 1.4.3 间接免疫荧光分析方法 | 第38-39页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第39-41页 |
| 1.6 实验技术路线图 | 第41-42页 |
| 第二章 猴B病毒重组gD蛋白的原核表达 | 第42-66页 |
| 2.1 实验材料 | 第42-45页 |
| 2.1.1 菌株载体与酶类 | 第42-43页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第43页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第43-44页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第44-45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-52页 |
| 2.2.1 目的基因BV-gD基因的获得 | 第45页 |
| 2.2.2 pET-32a-gD重组质粒的提取 | 第45-46页 |
| 2.2.3 重组质粒双酶切和菌液PCR验证 | 第46-47页 |
| 2.2.4 重组质粒转化E.coli Rosetta (DE3)感受态细胞 | 第47-48页 |
| 2.2.5 重组蛋白的诱导表达 | 第48-49页 |
| 2.2.6 确定表达产物在细胞内存在形式 | 第49页 |
| 2.2.7 重组蛋白的大量表达 | 第49页 |
| 2.2.8 重组蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 2.2.9 蛋白浓度的测定(BCA方法) | 第50-51页 |
| 2.2.10 目的蛋白的Western-Blot验证 | 第51页 |
| 2.2.11 间接ELISA检测方法的建立 | 第51-52页 |
| 2.3 实验结果 | 第52-63页 |
| 2.3.1 BV-gD基因的获得 | 第52-53页 |
| 2.3.2 重组质粒pET-32a-gD的酶切鉴定 | 第53-55页 |
| 2.3.3 重组蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第55-57页 |
| 2.3.4 重组蛋白的纯化条件 | 第57-59页 |
| 2.3.5 重组蛋白浓度的测定结果 | 第59-60页 |
| 2.3.6 目的蛋白的Western-Blot验证结果 | 第60-61页 |
| 2.3.7 间接ELISA检测方法的建立 | 第61-63页 |
| 2.4 讨论 | 第63-65页 |
| 2.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第三章 抗BV单克隆抗体的制备 | 第66-87页 |
| 3.1 材料与方法 | 第66-76页 |
| 3.1.1 实验动物和细胞 | 第66页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第66-67页 |
| 3.1.3 实验溶液的配制 | 第67-68页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第68页 |
| 3.1.5 免疫小鼠及多抗血清效价检测 | 第68-70页 |
| 3.1.6 SP2/0骨髓瘤细胞的准备 | 第70页 |
| 3.1.7 免疫脾细胞以及饲养细胞的制备 | 第70-71页 |
| 3.1.8 细胞融合 | 第71页 |
| 3.1.9 杂交瘤细胞上清检测 | 第71-72页 |
| 3.1.10 杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法) | 第72页 |
| 3.1.11 杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第72页 |
| 3.1.12 BV单克隆抗体细胞上清效价测定 | 第72-73页 |
| 3.1.13 BV单克隆抗体的亚型鉴定 | 第73页 |
| 3.1.14 BV单克隆抗体腹水制备及其抗体效价测定 | 第73页 |
| 3.1.15 HSV-2病毒的培养 | 第73-74页 |
| 3.1.16 单克隆抗体纯化及浓度测定 | 第74页 |
| 3.1.17 间接免疫荧光验证单抗与HSV-2gD同源蛋白的特异性 | 第74-75页 |
| 3.1.18 Western-Blot鉴定单抗对病毒编码蛋白的反应性 | 第75-76页 |
| 3.1.19 单克隆抗体稳定性鉴定 | 第76页 |
| 3.2 实验结果 | 第76-83页 |
| 3.2.1 间接ELISA法检测多抗血清效价 | 第76页 |
| 3.2.2 杂交瘤细胞株的建立 | 第76-77页 |
| 3.2.3 单克隆抗体细胞上清效价的测定 | 第77-78页 |
| 3.2.4 单克隆抗体亚型鉴定结果 | 第78页 |
| 3.2.5 单克隆抗体腹水效价测定 | 第78-79页 |
| 3.2.6 单克隆抗体纯化及浓度测定 | 第79-80页 |
| 3.2.7 HSV-2病毒培养 | 第80页 |
| 3.2.8 五株单抗的间接免疫荧光验证结果 | 第80-81页 |
| 3.2.9 五株单抗的Western-Blot验证结果 | 第81-83页 |
| 3.2.10 gD重组蛋白单克隆抗体的稳定性分析 | 第83页 |
| 3.3 讨论 | 第83-86页 |
| 3.4 本章小结 | 第86-87页 |
| 第四章 全文结论 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第97-98页 |
| 附录B 其他需要说明的内容 | 第98页 |
