缩略语表 | 第7-11页 |
中文摘要 | 第11-14页 |
ABSTRACT | 第14-16页 |
前言 | 第17-20页 |
文献回顾 | 第20-32页 |
1 哮喘的病因 | 第20页 |
2 哮喘的病理特征 | 第20-21页 |
3 气道重塑及其特点 | 第21-22页 |
3.1 气道上皮细胞损伤修复 | 第21页 |
3.2 气道平滑肌细胞增殖肥大 | 第21页 |
3.3 气道成纤维细胞增殖及胶原沉积 | 第21-22页 |
3.4 气道杯状细胞增生和过分泌 | 第22页 |
3.5 气道上皮下微血管形成增多 | 第22页 |
4 哮喘与气道新生血管形成 | 第22-26页 |
4.1 血管新生的概念 | 第22页 |
4.2 支气管哮喘中新生血管 | 第22-23页 |
4.3 新生血管对支气管哮喘的影响 | 第23-24页 |
4.3.1 影响气道炎症 | 第23-24页 |
4.3.2 影响气道其他结构细胞 | 第24页 |
4.3.3 影响气道机械动力学 | 第24页 |
4.4 支气管哮喘与促血管因子 | 第24-26页 |
4.4.1 炎症介质 | 第24-25页 |
4.4.2 生长因子 | 第25页 |
4.4.3 趋化因子 | 第25-26页 |
5 AMPK | 第26-32页 |
5.1 AMPK的结构、活性调节及生物学作用 | 第26-28页 |
5.2 AMPK调控炎症的机制 | 第28-29页 |
5.2.1 AMPK与炎症细胞 | 第28页 |
5.2.2 AMPK与炎症因子 | 第28-29页 |
5.3 AMPK调控细胞增殖的机制 | 第29-32页 |
5.3.1 通过抑制雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)抑制增殖 | 第29页 |
5.3.2 通过阻断细胞周期抑制增殖 | 第29-30页 |
5.3.3 通过调节糖及脂质代谢抑制增殖 | 第30-32页 |
第一部分 激活AMPK抑制慢性哮喘小鼠气道炎症和气道重塑 | 第32-55页 |
1 实验材料与仪器 | 第33-35页 |
1.1 实验动物 | 第33页 |
1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
1.3 主要仪器 | 第34-35页 |
1.4 试剂配制 | 第35页 |
2 实验方法 | 第35-43页 |
2.1 动物造模及分组 | 第35-36页 |
2.2 血清、支气管肺泡灌洗液收集及细胞分类计数 | 第36页 |
2.3 小鼠血清OVA特异性IgE的测定 | 第36-37页 |
2.3.1 准备试剂与收集血样 | 第36-37页 |
2.3.2 检测程序 | 第37页 |
2.4 小鼠BALF中IL-4、IL5、IL-13、TNF-α、TGF-β、MMP9表达水平的的测定 | 第37页 |
2.5 小鼠血清VEGF、CXCR-4、SDF-1 表达水平的测定 | 第37页 |
2.6 气管肺组织病理学检查 | 第37-40页 |
2.6.1 石蜡切片HE染色实验步骤 | 第38页 |
2.6.2 石蜡切片高碘酸雪夫(periodic acid Schiff,PAS)染色实验步骤 | 第38-39页 |
2.6.3 石蜡切片Masson’s染色实验步骤 | 第39页 |
2.6.4 石蜡切片免疫组化实验步骤 | 第39-40页 |
2.6.5 石蜡切片免疫荧光实验步骤 | 第40页 |
2.7 组织蛋白的提取 | 第40-41页 |
2.8 蛋白定量 | 第41页 |
2.9 免疫印迹技术检测目的蛋白的表达和磷酸化 | 第41-43页 |
2.9.1 配胶及样品处理 | 第41-42页 |
2.9.2 SDS-PAGE 电泳和转移 | 第42页 |
2.9.3 封闭杂交 | 第42-43页 |
2.9.4 发光鉴定 | 第43页 |
2.10 统计学分析 | 第43页 |
3 结果 | 第43-52页 |
3.1 动物一般情况 | 第43页 |
3.2 各组小鼠BALF中细胞总数和分类计数及外周血OVA特异性Ig E的比较 | 第43-44页 |
3.3 各组小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α、TGF-β、MMP-9 表达水平的比较 | 第44-45页 |
3.4 肺组织普通病理学染色观察 | 第45-47页 |
3.5 肺组织免疫组化 α-SMA、MMP-9、TGF-β 染色观察 | 第47-48页 |
3.6 各组小鼠外周血VEGF、CXCR4及SDF-1 表达水平的比较 | 第48-49页 |
3.7 肺组织免疫组化CD31染色结果的比较 | 第49-50页 |
3.8 肺组织免疫荧光CD31染色结果的比较 | 第50页 |
3.9 肺组织免疫组化p-AMPK染色结果的比较 | 第50-51页 |
3.10 肺组织Western Blot检测p-AMPK及AMPK表达情况 | 第51-52页 |
4 讨论 | 第52-55页 |
第二部分 激活AMPK抑制VEGF诱导的血管内皮增殖的作用及分子机制 | 第55-68页 |
1 实验材料与仪器 | 第56-59页 |
1.1 实验细胞分组及干预 | 第56页 |
1.2 主要试剂 | 第56-57页 |
1.3 主要仪器 | 第57-58页 |
1.4 试剂配制 | 第58-59页 |
2 实验方法 | 第59-63页 |
2.1 细胞复苏 | 第59-60页 |
2.2 培养液的更换及细胞传代 | 第60-61页 |
2.3 细胞冻存 | 第61页 |
2.4 细胞蛋白的提取 | 第61-62页 |
2.5 蛋白定量方法 | 第62页 |
2.6 Western Blot进行蛋白相对定量 | 第62页 |
2.7 Brdu试剂盒检测细胞增殖 | 第62页 |
2.8 统计学分析 | 第62-63页 |
3 结果 | 第63-66页 |
3.1 VEGF对HUVEC增殖的刺激作用 | 第63页 |
3.2 二甲双胍对HUVEC增殖的影响 | 第63-64页 |
3.3 二甲双胍和Compound C对HUVEC内AMPK活性的影响 | 第64-65页 |
3.4 AMPK对VEGF诱导HUVEC增殖的抑制作用 | 第65页 |
3.5AMPK对HUVEC内周期相关蛋白表达水平的影响 | 第65-66页 |
4 讨论 | 第66-68页 |
小结 | 第68-69页 |
参考文献 | 第69-81页 |
个人简历和研究成果 | 第81-82页 |
致谢 | 第82页 |