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AMPK在慢性哮喘小鼠模型气道炎症和重塑形成中的作用及机制研究

缩略语表第7-11页
中文摘要第11-14页
ABSTRACT第14-16页
前言第17-20页
文献回顾第20-32页
    1 哮喘的病因第20页
    2 哮喘的病理特征第20-21页
    3 气道重塑及其特点第21-22页
        3.1 气道上皮细胞损伤修复第21页
        3.2 气道平滑肌细胞增殖肥大第21页
        3.3 气道成纤维细胞增殖及胶原沉积第21-22页
        3.4 气道杯状细胞增生和过分泌第22页
        3.5 气道上皮下微血管形成增多第22页
    4 哮喘与气道新生血管形成第22-26页
        4.1 血管新生的概念第22页
        4.2 支气管哮喘中新生血管第22-23页
        4.3 新生血管对支气管哮喘的影响第23-24页
            4.3.1 影响气道炎症第23-24页
            4.3.2 影响气道其他结构细胞第24页
            4.3.3 影响气道机械动力学第24页
        4.4 支气管哮喘与促血管因子第24-26页
            4.4.1 炎症介质第24-25页
            4.4.2 生长因子第25页
            4.4.3 趋化因子第25-26页
    5 AMPK第26-32页
        5.1 AMPK的结构、活性调节及生物学作用第26-28页
        5.2 AMPK调控炎症的机制第28-29页
            5.2.1 AMPK与炎症细胞第28页
            5.2.2 AMPK与炎症因子第28-29页
        5.3 AMPK调控细胞增殖的机制第29-32页
            5.3.1 通过抑制雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)抑制增殖第29页
            5.3.2 通过阻断细胞周期抑制增殖第29-30页
            5.3.3 通过调节糖及脂质代谢抑制增殖第30-32页
第一部分 激活AMPK抑制慢性哮喘小鼠气道炎症和气道重塑第32-55页
    1 实验材料与仪器第33-35页
        1.1 实验动物第33页
        1.2 主要试剂第33-34页
        1.3 主要仪器第34-35页
        1.4 试剂配制第35页
    2 实验方法第35-43页
        2.1 动物造模及分组第35-36页
        2.2 血清、支气管肺泡灌洗液收集及细胞分类计数第36页
        2.3 小鼠血清OVA特异性IgE的测定第36-37页
            2.3.1 准备试剂与收集血样第36-37页
            2.3.2 检测程序第37页
        2.4 小鼠BALF中IL-4、IL5、IL-13、TNF-α、TGF-β、MMP9表达水平的的测定第37页
        2.5 小鼠血清VEGF、CXCR-4、SDF-1 表达水平的测定第37页
        2.6 气管肺组织病理学检查第37-40页
            2.6.1 石蜡切片HE染色实验步骤第38页
            2.6.2 石蜡切片高碘酸雪夫(periodic acid Schiff,PAS)染色实验步骤第38-39页
            2.6.3 石蜡切片Masson’s染色实验步骤第39页
            2.6.4 石蜡切片免疫组化实验步骤第39-40页
            2.6.5 石蜡切片免疫荧光实验步骤第40页
        2.7 组织蛋白的提取第40-41页
        2.8 蛋白定量第41页
        2.9 免疫印迹技术检测目的蛋白的表达和磷酸化第41-43页
            2.9.1 配胶及样品处理第41-42页
            2.9.2 SDS-PAGE 电泳和转移第42页
            2.9.3 封闭杂交第42-43页
            2.9.4 发光鉴定第43页
        2.10 统计学分析第43页
    3 结果第43-52页
        3.1 动物一般情况第43页
        3.2 各组小鼠BALF中细胞总数和分类计数及外周血OVA特异性Ig E的比较第43-44页
        3.3 各组小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α、TGF-β、MMP-9 表达水平的比较第44-45页
        3.4 肺组织普通病理学染色观察第45-47页
        3.5 肺组织免疫组化 α-SMA、MMP-9、TGF-β 染色观察第47-48页
        3.6 各组小鼠外周血VEGF、CXCR4及SDF-1 表达水平的比较第48-49页
        3.7 肺组织免疫组化CD31染色结果的比较第49-50页
        3.8 肺组织免疫荧光CD31染色结果的比较第50页
        3.9 肺组织免疫组化p-AMPK染色结果的比较第50-51页
        3.10 肺组织Western Blot检测p-AMPK及AMPK表达情况第51-52页
    4 讨论第52-55页
第二部分 激活AMPK抑制VEGF诱导的血管内皮增殖的作用及分子机制第55-68页
    1 实验材料与仪器第56-59页
        1.1 实验细胞分组及干预第56页
        1.2 主要试剂第56-57页
        1.3 主要仪器第57-58页
        1.4 试剂配制第58-59页
    2 实验方法第59-63页
        2.1 细胞复苏第59-60页
        2.2 培养液的更换及细胞传代第60-61页
        2.3 细胞冻存第61页
        2.4 细胞蛋白的提取第61-62页
        2.5 蛋白定量方法第62页
        2.6 Western Blot进行蛋白相对定量第62页
        2.7 Brdu试剂盒检测细胞增殖第62页
        2.8 统计学分析第62-63页
    3 结果第63-66页
        3.1 VEGF对HUVEC增殖的刺激作用第63页
        3.2 二甲双胍对HUVEC增殖的影响第63-64页
        3.3 二甲双胍和Compound C对HUVEC内AMPK活性的影响第64-65页
        3.4 AMPK对VEGF诱导HUVEC增殖的抑制作用第65页
        3.5AMPK对HUVEC内周期相关蛋白表达水平的影响第65-66页
    4 讨论第66-68页
小结第68-69页
参考文献第69-81页
个人简历和研究成果第81-82页
致谢第82页

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