| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-23页 |
| 1.1 RNA编辑酶成员 | 第16-20页 |
| 1.1.1 ADAR基因家族成员 | 第16-18页 |
| 1.1.2 APOBEC基因家族成员 | 第18-20页 |
| 1.2 RNA编辑酶功能简介 | 第20-21页 |
| 1.3 RNA编辑酶参与病毒进化 | 第21页 |
| 1.4 RNA编辑酶参与先天性免疫 | 第21-23页 |
| 第二章 鸡RNA编辑酶基因克隆及序列分析 | 第23-45页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 材料 | 第23-24页 |
| 2.2.1 动物材料 | 第23页 |
| 2.2.2 病毒和菌株 | 第23页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.4 主要仪器和软件 | 第24页 |
| 2.3 方法 | 第24-36页 |
| 2.3.1 鸡ADAR1基因扩增及质粒构建 | 第24-29页 |
| 2.3.2 鸡ADAR2基因扩增及真核表达质粒构建 | 第29-30页 |
| 2.3.3 鸡AID基因的扩增及其真核表达质粒构建 | 第30-33页 |
| 2.3.4 鸡APOBEC4基因扩增及真核表达质粒构建 | 第33-36页 |
| 2.4 结果 | 第36-44页 |
| 2.4.1 鸡ADAR1基因的扩增 | 第36-37页 |
| 2.4.2 鸡ADAR1完整阅读框序列的扩增及真核表达质粒构建 | 第37页 |
| 2.4.3 鸡ADAR1基因的遗传进化分析 | 第37-38页 |
| 2.4.4 鸡ADAR2基因的扩增及真核质粒构建 | 第38-39页 |
| 2.4.5 鸡ADAR2基因的遗传进化分析 | 第39-41页 |
| 2.4.6 鸡AID基因的扩增及其真核表达质粒的构建 | 第41-42页 |
| 2.4.7 鸡AID基因的遗传进化分析 | 第42-43页 |
| 2.4.8 鸡APOBEC4基因的扩增及真核表达质粒构建 | 第43页 |
| 2.4.9 鸡APOBEC4基因遗传进化分析 | 第43-44页 |
| 2.5 讨论 | 第44-45页 |
| 第三章 鸡ADAR2多克隆抗体的制备 | 第45-58页 |
| 3.1 前言 | 第45页 |
| 3.2 材料 | 第45-46页 |
| 3.2.1 生物材料与试剂 | 第45-46页 |
| 3.2.2 主要缓冲液及试剂配制 | 第46页 |
| 3.3 方法 | 第46-51页 |
| 3.3.1 构建ADAR2原核表达质粒及酶切鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.2 鸡ADAR2蛋白原核表达质粒小量诱导表达 | 第47页 |
| 3.3.3 Western-Blot鉴定鸡ADAR2的原核表达 | 第47页 |
| 3.3.4 鸡ADAR2蛋白大量原核诱导表达 | 第47-48页 |
| 3.3.5 包涵体洗涤与溶解 | 第48页 |
| 3.3.6 构建鸡ADAR2基因分段表达质粒 | 第48-49页 |
| 3.3.7 鸡ADAR2蛋白片段的小量原核诱导表达 | 第49页 |
| 3.3.8 鸡ADAR2蛋白片段大量原核诱导表达 | 第49-50页 |
| 3.3.9 包涵体洗涤与溶解 | 第50页 |
| 3.3.10 蛋白定量及免疫小鼠 | 第50页 |
| 3.3.11 鸡ADAR2抗体ELISA效价的检测 | 第50页 |
| 3.3.12 鸡ADAR2抗体的Western-Blot检测 | 第50-51页 |
| 3.3.13 鸡ADAR2抗体的间接免疫荧光检测 | 第51页 |
| 3.4 结果 | 第51-56页 |
| 3.4.1 构建ADAR2原核表达质粒 | 第51页 |
| 3.4.2 pET-28a-ADAR2重组蛋白的小量诱导表达 | 第51-52页 |
| 3.4.3 Western-Blot鉴定pET-28a-ADAR2重组蛋白诱导表达 | 第52-53页 |
| 3.4.4 SDS-PAGE鉴定pET-28a-ADAR2重组蛋白的表达状态 | 第53页 |
| 3.4.5 pET-28a-ARC重组质粒鉴定 | 第53-54页 |
| 3.4.6 鸡ADAR2蛋白片段小量诱导表达 | 第54页 |
| 3.4.7 鸡ADAR2蛋白片段大量诱导表达 | 第54页 |
| 3.4.8 鸡ADAR2蛋白片段原核表达产物的溶解 | 第54-56页 |
| 3.4.9 鸡ADAR2抗体的间接免疫荧光检测 | 第56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 四种RNA编辑酶在鸡体内分布及其对NDV增殖的初步研究 | 第58-77页 |
| 4.1 前言 | 第58页 |
| 4.2 材料 | 第58-59页 |
| 4.2.1 病毒和刺激物 | 第58页 |
| 4.2.2 试剂 | 第58-59页 |
| 4.3 方法 | 第59-64页 |
| 4.3.1 Real-time PCR检测方法的建立 | 第59-60页 |
| 4.3.2 Real-time PCR检测鸡脏器及原代细胞中RNA编辑酶的分布情况 | 第60页 |
| 4.3.3 Western-Blot验证鸡脏器及原代细胞中ADAR2和APOBEC4的表达 | 第60-61页 |
| 4.3.4 NDV感染和刺激物刺激对CEF细胞RNA编辑酶表达的影响 | 第61-62页 |
| 4.3.5 NDV感染对鸡胚淋巴细胞中RNA编辑酶表达的影响 | 第62页 |
| 4.3.6 NDV感染对雏鸡体内RNA编辑酶表达的影响 | 第62页 |
| 4.3.7 外源性RNA编辑酶对NDV增殖的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.8 ADAR2编辑功能初步验证 | 第63-64页 |
| 4.4 结果 | 第64-75页 |
| 4.4.1 Real-time PCR检测方法的建立 | 第64-66页 |
| 4.4.2 Real-time PCR检测鸡脏器及原代细胞中RNA编辑酶的分布情况 | 第66页 |
| 4.4.3 Western-Blot验证鸡脏器和原代细胞中ADAR2和APOBEC4的表达 | 第66-67页 |
| 4.4.4 NDV感染和刺激物刺激对CEF细胞RNA编辑酶表达的影响 | 第67-68页 |
| 4.4.5 NDV感染对鸡胚淋巴细胞中RNA编辑酶表达水平的影响 | 第68-69页 |
| 4.4.6 NDV感染对雏鸡体内RNA编辑酶表达的影响 | 第69页 |
| 4.4.7 外源性RNA编辑酶对NDV增殖的影响 | 第69-74页 |
| 4.4.8 ADAR2编辑功能初步验证 | 第74-75页 |
| 4.5 讨论 | 第75-77页 |
| 第五章 全文总结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 作者简历 | 第86页 |
