| 中文摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 Aβ级联假说 | 第12-17页 |
| 1.1.1 Aβ的产生及其前体蛋白 | 第13-15页 |
| 1.1.2 Aβ42的毒性 | 第15-17页 |
| 1.2 AD的免疫治疗 | 第17-18页 |
| 1.3 γ-分泌酶抑制剂在AD治疗中的作用 | 第18-22页 |
| 1.3.1 γ-分泌酶的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.2 γ-分泌酶抑制剂的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4 天然药物在AD治疗中的研究 | 第22-26页 |
| 第2章 针对Aβ42寡聚体靶点的抗Aβ42抗体的效应分析 | 第26-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌种和质粒及实验动物 | 第26页 |
| 2.1.2 生物试剂、抗体 | 第26-27页 |
| 2.1.3 细胞株及细胞培养相关试剂 | 第27页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 抗体的制备 | 第27页 |
| 2.2.2 抗体亚型的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.3 Aβ42不同聚集形式的的制备及观察 | 第28页 |
| 2.2.4 抗体对不同聚集形式的Aβ42识别特异性差异的检测 | 第28页 |
| 2.2.5 转染 | 第28-29页 |
| 2.2.6 MTT法检测细胞活力 | 第29页 |
| 2.2.7 抗体对转染了APP的细胞在Aβ42基质上粘附的影响 | 第29-30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-32页 |
| 2.3.1 抗Aβ42抗体的亚型分析 | 第30-31页 |
| 2.3.2 抗体对Aβ42不同聚集形式的识别特异性分析 | 第31页 |
| 2.3.3 抗体对转染了APP的细胞在Aβ42寡聚体基质上粘附的影响 | 第31-32页 |
| 2.4 本章小结 | 第32-34页 |
| 第3章 针对Aβ42寡聚体靶点的天然药物效应分析 | 第34-62页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第35-37页 |
| 3.1.1 载体质粒、菌株、细胞系 | 第35-36页 |
| 3.1.2 工具酶 | 第36页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第36页 |
| 3.1.4 天然药物材及天然药物组分 | 第36页 |
| 3.1.5 抗体及转染试剂 | 第36页 |
| 3.1.6 高粘性96孔板 | 第36页 |
| 3.1.7 主要实验设备 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-46页 |
| 3.2.1 质粒的提取与纯化 | 第37页 |
| 3.2.2 DNA的定量测定 | 第37页 |
| 3.2.3 总RNA的提取与反转录 | 第37页 |
| 3.2.4 引物设计 | 第37-38页 |
| 3.2.5 目的片段的扩增 | 第38-39页 |
| 3.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 3.2.7 质粒的转化 | 第39页 |
| 3.2.8 限制性内切酶酶切反应 | 第39页 |
| 3.2.9 DNA鉴定、分离与回收 | 第39页 |
| 3.2.10 外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第39页 |
| 3.2.11 阳性菌株筛选及菌落PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.12 阳性菌株的酶切鉴定 | 第40页 |
| 3.2.13 重组蛋白的诱导表达 | 第40页 |
| 3.2.14 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第40-41页 |
| 3.2.15 表达菌体的裂解 | 第41-42页 |
| 3.2.16 蛋白印迹(Western blotting)检测 | 第42页 |
| 3.3.17 目的蛋白表达水平分析 | 第42页 |
| 3.2.18 天然药物提取物的制备 | 第42页 |
| 3.2.19 PC12细胞培养 | 第42-43页 |
| 3.2.20 MTT实验分组 | 第43页 |
| 3.2.21 MTT法检测天然药物提取物对Aβ42神经毒性的影响 | 第43页 |
| 3.2.22 MTT法检测单体化合物对Aβ42的神经毒性的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.23 细胞爬片 | 第44页 |
| 3.2.24 免疫荧光 | 第44-45页 |
| 3.2.25 电镜观察单体化合物对Aβ42纤维化的抑制作用 | 第45页 |
| 3.2.26 单体化合物对转染了APP的靶细胞在Aβ42基质上粘附的影响 | 第45页 |
| 3.2.27 细胞裂解 | 第45页 |
| 3.2.28 单体化合物对转染了PS1的靶细胞在C99、Notch△E基质上粘附的影响 | 第45页 |
| 3.2.29 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,co-IP) | 第45-46页 |
| 3.2.30 单体化合物对PS1和C99(或Notch△E)相互作用的影响 | 第46页 |
| 3.3 实验结果 | 第46-59页 |
| 3.3.1 表达载体的构建 | 第46-49页 |
| 3.3.2 阳性克隆的鉴定 | 第49-51页 |
| 3.3.2.1 PEGFP-C3-PS1F、PEGFP-C3-PS1N、PEGFP-C3-PS1C阳性克隆的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3.2.2 pET28a-C99、pcDNA3.1-C99阳性克隆的鉴定 | 第50页 |
| 3.3.2.3 pcDNA3.1-Notch△E、pET28a-Notch△E阳性克隆的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.3 C99、Notch△E的表达与纯化 | 第51-52页 |
| 3.3.3.1 PET-28A-C99的表达与纯化 | 第51-52页 |
| 3.3.3.2 PET-28A-NOTCH△E的表达与纯化 | 第52页 |
| 3.3.4 天然药物提取物的获得 | 第52-53页 |
| 3.3.5 天然药物提取物对Aβ42诱导的神经毒性的抑制作用 | 第53页 |
| 3.3.6 天然药物提取物对Aβ42诱导的神经毒性的中和作用 | 第53-54页 |
| 3.3.7 单体化合物对Aβ42诱导的神经毒性的抑制作用 | 第54-55页 |
| 3.3.8 单体化合物对Aβ42诱导的细胞毒性的中和作用 | 第55-56页 |
| 3.3.9 母菊内酯、母菊黄酮对Aβ42纤维化的影响 | 第56页 |
| 3.3.10 母菊内酯、母菊黄酮抑制转染了APP的靶细胞在Aβ42基质上的粘附 | 第56-57页 |
| 3.3.11 目的蛋白在COS-7细胞中的表达及定位 | 第57-58页 |
| 3.3.11.1 PS1-F、PS1-N、PS1-C在COS-7细胞中的表达和定位 | 第57页 |
| 3.3.11.2 C99、Notch△E在COS-7细胞中的表达和定位 | 第57-58页 |
| 3.3.12 母菊内酯、母菊黄酮抑制转染了PS1的靶细胞在C99、Notch△E基质上的粘附 | 第58页 |
| 3.3.13 母菊内酯、母菊黄酮对PS1与C99或Notch△E结合性的影响 | 第58-59页 |
| 3.4 本章小结 | 第59-62页 |
| 全文结论 | 第62-63页 |
| 本文创新点 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 博士期间发表的学术论文及其他科研成果 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
