| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-37页 |
| 第一章 卵透明带不育疫苗的研究进展 | 第14-25页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1 不同ZP疫苗类型及其免疫不育的效果 | 第15-17页 |
| 1.1 蛋白疫苗 | 第16页 |
| 1.2 病毒疫苗 | 第16-17页 |
| 1.3 DNA疫苗 | 第17页 |
| 2 细胞因子佐剂对DNA疫苗的影响 | 第17-20页 |
| 2.1 GM-CSF对DNA疫苗的影响 | 第18-19页 |
| 2.2 细胞因子IL-4和IL-5对DNA疫苗的影响 | 第19-20页 |
| 3 增强DNA疫苗粘膜免疫原性 | 第20页 |
| 4 降低ZP疫苗引起的卵巢炎 | 第20-21页 |
| 5 结论与展望 | 第21页 |
| 参考文献 | 第21-25页 |
| 第二章 GM-CSF调控树突状细胞的发育与功能 | 第25-37页 |
| 引言 | 第25-26页 |
| 1 树突状细胞的分类、分布及功能 | 第26-29页 |
| 1.1 迁移性DCs的抗原捕获与递呈 | 第26-27页 |
| 1.2 类浆细胞DCs的抗原捕获与递呈 | 第27页 |
| 1.3 淋巴固有DCs抗原捕获与递呈 | 第27-29页 |
| 2 GM-CSF对DC亚群发育的影响 | 第29-31页 |
| 3 GM-CSF调控DC发育的分子机制 | 第31-33页 |
| 4 GM-CSF的临床应用 | 第33-34页 |
| 5 结论与展望 | 第34页 |
| 参考文献 | 第34-37页 |
| 第二部分 研究正文 | 第37-118页 |
| 第一章 细胞因子对小鼠卵透明带3 DNA疫苗肌肉免疫效果的影响 | 第37-93页 |
| 第一节 GM-CSF重组质粒的构建及其对APCS抗原递呈活性的影响 | 第37-53页 |
| 引言 | 第38-39页 |
| 1 材料与方法 | 第39-45页 |
| 1.1 质粒 | 第39页 |
| 1.2 实验动物 | 第39页 |
| 1.3 主要试剂 | 第39-40页 |
| 1.4 GM-CSF基因重组质粒的构建及鉴定 | 第40-42页 |
| 1.4.1 PCR引物的设计合成 | 第40页 |
| 1.4.2 脾脏总RNA的提取 | 第40页 |
| 1.4.3 反转录 | 第40-41页 |
| 1.4.4 GM-CSF基因片段的PCR扩增 | 第41页 |
| 1.4.5 双酶切 | 第41页 |
| 1.4.6 PCR产物胶回收 | 第41页 |
| 1.4.7 连接反应 | 第41-42页 |
| 1.4.8 重组质粒转化大肠杆菌 | 第42页 |
| 1.5 质粒DNA的大量制备、鉴定、纯化与定量 | 第42-43页 |
| 1.6 重组质粒肝脏转染及表达检测 | 第43页 |
| 1.6.1 尾静脉高压水动力转染 | 第43页 |
| 1.6.2 重组质粒在小鼠肝脏中的表达检测 | 第43页 |
| 1.7 GM-CSF对肌肉中APCs成熟的影响 | 第43-44页 |
| 1.7.1 重组质粒肌肉注射免疫小鼠 | 第43页 |
| 1.7.2 肌肉组织总RNA的提取及CD80分子的表达检测 | 第43-44页 |
| 1.8 肌肉注射GM-CSF对脾脏APCs成熟的影响 | 第44-45页 |
| 1.8.1 重组质粒肌肉注射免疫小鼠 | 第44页 |
| 1.8.2 脾脏组织总RNA的提取及共刺激分子的表达检测 | 第44-45页 |
| 1.9 数据统计 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-49页 |
| 2.1 小鼠GM-CSF真核表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 2.2 重组质粒pcD-GM-CSF质粒在小鼠肝脏内的表达 | 第46页 |
| 2.3 mZP3 DNA疫苗的双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| 2.4 GM-CSF对注射部位APCs成熟的影响 | 第47-48页 |
| 2.5 GM-CSF对脾脏APCs成熟的影响 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 第二节 肌肉注射GM-CSF和IL-5对mZP3 DNA疫苗免疫不育效果的影响 | 第53-82页 |
| 引言 | 第54-55页 |
| 1 材料和方法 | 第55-65页 |
| 1.1 质粒和菌株 | 第55页 |
| 1.2 实验动物及抗体 | 第55页 |
| 1.3 生化试剂 | 第55-59页 |
| 1.4 mZP3融合蛋白的诱导表达及定量 | 第59-60页 |
| 1.5 mZP3蛋白Western blotting | 第60-61页 |
| 1.6 IL-5重组质粒的构建 | 第61页 |
| 1.7 重组质粒在小鼠肝脏中的表达检测 | 第61-62页 |
| 1.8 实验动物的免疫 | 第62页 |
| 1.9 合笼方法 | 第62页 |
| 1.10 卵巢组织学分析 | 第62页 |
| 1.11 抗体检测 | 第62-63页 |
| 1.12 T细胞增殖 | 第63页 |
| 1.13 细胞因子染色 | 第63-64页 |
| 1.14 流式细胞术检测DCs表面分子 | 第64-65页 |
| 1.15 统计学分析 | 第65页 |
| 2 结果 | 第65-76页 |
| 2.1 mZP3蛋白的原核表达及Western blot鉴定 | 第65-66页 |
| 2.2 重组质粒pcD-IL-5的构建、大量制备及鉴定 | 第66-67页 |
| 2.3 重组质粒pcD-IL-5质粒在动物肝脏内的表达 | 第67-68页 |
| 2.4 肌肉注射GM-CSF和IL-5对mZP3 DNA疫苗生育率的影响 | 第68-69页 |
| 2.5 GM-CSF与IL-5对mZP3 DNA疫苗诱导的体液免疫的影响 | 第69-70页 |
| 2.6 卵巢形态学观察 | 第70-72页 |
| 2.7 细胞免疫反应 | 第72-74页 |
| 2.8 流式检测细胞因子的表达 | 第74-75页 |
| 2.9 GM-CSF促进DCs的成熟 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 第三节 肌肉免疫GM-CSF和IL-4 对mZP3 DNA疫苗免疫不育的影响 | 第82-93页 |
| 引言 | 第82-83页 |
| 1 材料和方法 | 第83-85页 |
| 1.1 质粒和菌株 | 第83-84页 |
| 1.2 实验动物 | 第84页 |
| 1.3 生化试剂 | 第84页 |
| 1.4 IL-4重组质粒的构建 | 第84页 |
| 1.5 实验动物的免疫 | 第84页 |
| 1.6 合笼方法 | 第84页 |
| 1.7 抗体检测 | 第84页 |
| 1.8 统计学分析 | 第84-85页 |
| 2 结果 | 第85-89页 |
| 2.1 重组质粒pcD-IL-4的构建、大量制备及鉴定 | 第85-86页 |
| 2.2 重组质粒pcD-IL-4在动物肝脏内的表达 | 第86页 |
| 2.3 肌肉注射GM-CSF和IL-4对mZP3 DNA疫苗生育率的影响 | 第86-87页 |
| 2.4 GM-CSF与IL-4对mZP3 DNA疫苗诱导的体液免疫反应的影响 | 第87-88页 |
| 2.5 Real-time PCR检测脾脏中IL-4的表达 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| 第二章 滴鼻免疫细胞因子对mZP3 DNA疫苗不育效果的影响 | 第93-118页 |
| 第一节 滴鼻免疫GM-CSF对mZP3 DNA疫苗免疫不育效果的影响 | 第93-108页 |
| 引言 | 第94页 |
| 1 材料和方法 | 第94-97页 |
| 1.1 质粒和菌株 | 第94-95页 |
| 1.2 实验动物 | 第95页 |
| 1.3 质粒DNA的提取、纯化与定量 | 第95页 |
| 1.4 壳聚糖-质粒复合物的制备及电泳检测 | 第95页 |
| 1.5 实验动物的免疫 | 第95页 |
| 1.6 抗体检测 | 第95-96页 |
| 1.7 T细胞增殖实验 | 第96页 |
| 1.8 肺和卵巢组织HE染色 | 第96-97页 |
| 1.9 小鼠卵ZP的间接免疫荧光测定 | 第97页 |
| 1.10 流式细胞术检测DCs表型 | 第97页 |
| 1.11 统计学分析 | 第97页 |
| 2 结果 | 第97-103页 |
| 2.1 壳聚糖包裹质粒DNA | 第97-98页 |
| 2.2 GM-CSF和mZP3共免疫降低小鼠的生育率 | 第98页 |
| 2.3 体液免疫反应 | 第98-99页 |
| 2.4 抗体与卵子表面ZP3结合 | 第99-100页 |
| 2.5 细胞免疫反应和卵巢病理学 | 第100-102页 |
| 2.6 GM-CSF促进DCs细胞的成熟 | 第102-103页 |
| 2.7 小鼠肺的组织学检测 | 第103页 |
| 3 讨论 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-108页 |
| 第二节 GM-CSF和IL-5滴鼻共免疫对mZP3 DNA疫苗免疫不育效果的影响 | 第108-118页 |
| 引言 | 第109页 |
| 1 材料和方法 | 第109-112页 |
| 1.1 质粒和菌株 | 第109页 |
| 1.2 主要试剂 | 第109-111页 |
| 1.3 质粒DNA的提取、纯化与定量 | 第111页 |
| 1.4 动物免疫 | 第111-112页 |
| 1.5 抗生育实验 | 第112页 |
| 1.6 抗体检测 | 第112页 |
| 1.7 统计学分析 | 第112页 |
| 2 结果 | 第112-114页 |
| 2.1 体液免疫反应 | 第112-113页 |
| 2.2 GM-CSF和mZP3共免降低生育率 | 第113-114页 |
| 3 讨论 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-118页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第118-120页 |
| 附录1 英文缩略语 | 第120-121页 |
| 附录2 主要实验仪器 | 第121-122页 |
| 博士期间已发表和待发表的论文 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 个人简介 | 第124-125页 |
