中文摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-7页 |
第一章 多肽毒素研究进展 | 第11-24页 |
1.1 引言 | 第11页 |
1.2 多肽毒素 | 第11-16页 |
1.2.1 蜘蛛多肽毒素 | 第11-14页 |
1.2.2 其它多肽毒素 | 第14-16页 |
1.3 瞬时外向钾离子通道 | 第16-21页 |
1.3.1 钾离子通道的结构和分类 | 第16-19页 |
1.3.2 钾离子通道激活、失活机制 | 第19页 |
1.3.3 Kv4.2通道 | 第19-20页 |
1.3.4 钾离子通道的辅助亚基KChIP | 第20-21页 |
1.4 钾离子通道毒素 | 第21-22页 |
1.5 本课题的研究背景和意义 | 第22-24页 |
第二章 Kv4.2通道上与JZIX-V相互作用的关键残基的检测 | 第24-41页 |
2.1 前言 | 第24-25页 |
2.2 材料与方法 | 第25-33页 |
2.2.1. 试剂与材料 | 第25页 |
2.2.2 钠通道突变体的构建 | 第25-30页 |
2.2.2.1 突变体质粒构建 | 第25-26页 |
2.2.2.2 野生型Kv4.2质粒的甲基化 | 第26-27页 |
2.2.2.3 对野生型Kv4.2质粒进行体外定点突变 | 第27-30页 |
2.2.3 人陪肾细胞(HEK283T)细胞培养和转染 | 第30-32页 |
2.2.3.1 细胞冻存 | 第30页 |
2.2.3.2 细胞复苏 | 第30-31页 |
2.2.3.3 细胞传代 | 第31页 |
2.2.3.4 细胞转染 | 第31-32页 |
2.2.4 膜片钳活性分析 | 第32-33页 |
2.3 试验结果 | 第33-39页 |
2.3.1 JZTX-V与Kv4.2的相互作用 | 第33-35页 |
2.3.1.1 JZTX-V与野生型Kv4.2的浓效关系 | 第33页 |
2.3.1.2 JZTX-V对野生型Kv4.2激活动力学和失活动力学的影响 | 第33-35页 |
2.3.1.3 JZTX-V对野生型Kv4.2恢复时间常数的影响 | 第35页 |
2.3.2 Kv4.2通道突变体构建 | 第35-37页 |
2.3.3 JZTX-V和Kv4.2突变体相互作用 | 第37-39页 |
2.4 讨论 | 第39-41页 |
第三章 JZTX-V突变体与Kv4.2通道相互作用 | 第41-53页 |
3.1 前言 | 第41页 |
3.2 材料与方法 | 第41-46页 |
3.2.1 试剂与材料 | 第42页 |
3.2.2 JZTX-V及突变体合成、纯化 | 第42-45页 |
3.2.2.1 JZTX-V及突变体合成 | 第42-43页 |
3.2.2.2 多肽的分离纯化 | 第43页 |
3.2.2.3 质谱鉴定 | 第43-44页 |
2.2.2.4 多肤毒素的复性 | 第44页 |
3.2.2.5 复性后多肽的分离纯化 | 第44-45页 |
3.2.2.6 质谱鉴定 | 第45页 |
3.2.3 脂质体转染 | 第45-46页 |
3.2.4 JZTX-V及突变体二级结构测定 | 第46页 |
3.3 试验结果 | 第46-50页 |
3.3.1 JZTX-V合成 | 第46-48页 |
3.3.2 JZTX-V及其突变体活性测定 | 第48-50页 |
3.4 讨论 | 第50-53页 |
第四章 主要研究结论与进一步研究设想 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-65页 |
缩写表(中英文对照) | 第65-66页 |
致谢 | 第66-68页 |