| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| 1.1 斑马鱼心脏发育概述 | 第10-11页 |
| 1.2 锌指核糖核酸酶技术概述 | 第11-12页 |
| 1.3 OPEN打靶技术 | 第12-13页 |
| 1.4 TALEN打靶技术 | 第13-14页 |
| 1.5 脊椎动物早期心脏发育的分子调控 | 第14-16页 |
| 1.5.1 GATA转录因子 | 第14-16页 |
| 1.5.2 ATF4对细胞增殖的调控 | 第16页 |
| 1.6 POPDC家族简介 | 第16-17页 |
| 1.7 本文研究的意义 | 第17-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-35页 |
| 2.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 酶类和试剂盒 | 第19-20页 |
| 2.1.2 细胞系、菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 其他试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要实验仪器和耗材 | 第21页 |
| 2.1.5 生物信息学分析的主要软件与数据库 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-35页 |
| 2.2.1 TALEN打靶位点选择 | 第22-23页 |
| 2.2.2 TALE重复序列的融合 | 第23-24页 |
| 2.2.3 pCS-FokI-TALEN质粒的构建 | 第24页 |
| 2.2.4 pCS-FokI-TALEN质粒的构建 | 第24页 |
| 2.2.5 质粒的小量制备与鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.6 酶切产物的纯化回收 | 第25-26页 |
| 2.2.7 酶切产物与载体的连接 | 第26页 |
| 2.2.8 感受态细胞制备的方法 | 第26-27页 |
| 2.2.9 连接子的转化(热休克法) | 第27页 |
| 2.2.10 重组子的筛选和鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.11 PCR扩增目的片段 | 第28页 |
| 2.2.12 蛋白的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.13 SDS-PAGE | 第29-30页 |
| 2.2.14 Western-blot | 第30-31页 |
| 2.2.15 原核细胞的蛋白表达及纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.16 多克隆抗体的制备 | 第32页 |
| 2.2.17 斑马鱼显微注射技术 | 第32-33页 |
| 2.2.18 mRNA的转录合成 | 第33页 |
| 2.2.19 蛋白体内相互作用的检测 | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-51页 |
| 3.1 结果 | 第35-45页 |
| 3.1.1 morpholino敲低POP3表达后斑马鱼的表型分析 | 第35页 |
| 3.1.2 斑马鱼POP3基因OPEN法敲除突变体的鉴定：ZFP-Fokl(包括pMLM36-355R和pMLM36-355L)质粒有效性鉴定 | 第35-37页 |
| 3.1.3 TALEN打靶技术敲除斑马鱼POP3基因 | 第37-43页 |
| 3.1.3.1 斑马鱼POP3基因的打靶位点分析结果 | 第37页 |
| 3.1.3.2 TALE重复序列的融合 | 第37-41页 |
| 3.1.3.3 pCS-PEAS-125L质粒构建的鉴定 | 第41页 |
| 3.1.3.4 pCS-PERR-125R质粒构建的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.1.3.5 pCS2-TALEN质粒有效性鉴定 | 第42-43页 |
| 3.1.4 斑马鱼POP3多克隆抗体制备 | 第43-45页 |
| 3.2 其他结果 | 第45-51页 |
| 3.2.1 POP3和ATF4体内相互作用的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.2. 利用刺激因子研究POP3对心脏发育的调控机制 | 第46-47页 |
| 3.2.3 RT-PCR | 第47-48页 |
| 3.2.4 Gata4蛋白原核表达纯化及抗体制备 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
